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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于蛋白表达多个起始密码子的问题求教
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a13515517892

木虫 (小有名气)

[求助] 关于蛋白表达多个起始密码子的问题求教已有1人参与

初做蛋白表达的实验，有许多不懂的，最近的实验是蛋白表达，老板说我的序列会移码，我使用的克隆位点是SmaI-ClaI,紧接着SmalI的序列ATGAAAAA……已经有两个起始密码子了，要保证我插入的序列不移码的情况下，在SmaI(cccggg后面加个碱基)这样不会移码，但是翻译出来的蛋白是从哪里开始的呢？

关于蛋白表达多个起始密码子的问题求教
关于蛋白表达多个起始密码子的问题求教.png
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1楼2015-07-03 11:44:22
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liubx1006

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用的vector NTI 吗？不知道你的蛋白表达是以上面链为正向，还是以下面链？你所说的SMA1后面的序列ATGAAAAA是3‘到5’顺序的，正常序列不能这么看的。一般的DNA序列是按5‘到3’顺序，即上面的链是正向读，反相链是倒着读。另外，你的酶切位点选的有些近，做酶切的话不一定切彻底了，还有sma1是平末端，25°做酶切，Cla1是37度酶切……
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2楼2015-07-03 16:49:26
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a13515517892

木虫 (小有名气)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by liubx1006 at 2015-07-03 16:49:26
你用的vector NTI 吗？不知道你的蛋白表达是以上面链为正向，还是以下面链？你所说的SMA1后面的序列ATGAAAAA是3‘到5’顺序的，正常序列不能这么看的。一般的DNA序列是按5‘到3’顺序，即上面的链是正向读，反相链是 ...

你还没我专业啊，我最后合成做出来的序列肯定是上面的链按5‘到3’顺序至于其他的什么酶切不完全，这都不是你需要考虑的哦，我可以切开哈
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3楼2015-07-03 17:31:58
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