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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 大豆蛋白的电泳总是跑不出来，求解！！
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yoziqueen

新虫 (初入文坛)

[求助] 大豆蛋白的电泳总是跑不出来，求解！！ 已有9人参与

新手，做了很多次了，最近几次都是图上的样子
用的胶是自己配的，12.5%的分离胶，4.5%的浓缩胶，跑的时候电压220，到现在marker都没出来，还是因为胶不行吗？
到底是哪的问题呀……快疯了~

大豆蛋白的电泳总是跑不出来，求解！！
IMG_2073.JPG
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1楼 2015-06-30 09:28:25
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人觉得应该是胶的问题，不知道你的buffer配方及pH都是怎样的？
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2楼2015-06-30 11:15:56
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普通回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
mark都没跑出来一般就是你的胶以及电泳液的问题，可以再找一个人与你一起做这个蛋白表达电泳，做个对比看看
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
3楼2015-06-30 11:28:45
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相忘于少年

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
电压太高了，120就差不多了。跑胶用的一切试剂最好都换新配的。提高蛋白浓度试试

[ 发自小木虫客户端 ]
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修和无人见，存心有天知。
4楼2015-06-30 13:45:14
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yoziqueen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2015-06-30 11:15:56
个人觉得应该是胶的问题，不知道你的buffer配方及pH都是怎样的？

A液是30%丙烯酰胺定容，B液是1.5M的Tris-HCl，pH8.8，C液是0.5M的Tris-HCl，pH6.8，D液是10%过硫酸铵。
赞一下 回复此楼
5楼2015-06-30 14:41:04
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by yoziqueen at 2015-06-30 14:41:04
A液是30%丙烯酰胺定容，B液是1.5M的Tris-HCl，pH8.8，C液是0.5M的Tris-HCl，pH6.8，D液是10%过硫酸铵。...

只有这四种成分吗？SDS、TEMED也都按比例加了吗？
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6楼2015-06-30 14:46:52
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yoziqueen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by a86052 at 2015-06-30 14:46:52
只有这四种成分吗？SDS、TEMED也都按比例加了吗？...

分离胶用的12.5%的，TEMED10微升，配胶是ABCD加上TEMED还有水呀~~SDS在Tris-HCl里都有加
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7楼2015-06-30 15:09:32
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香樟树yh

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议恒流  浓缩胶6毫安 40分钟   分离胶12毫安  60分钟
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博士要毕业了
8楼2015-06-30 15:54:13
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半梦半醒间

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
能告诉我你的大豆蛋白分子量是多大的吗？谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
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玻璃心！！！
9楼2015-06-30 16:29:59
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wangminggj

禁虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
10楼2015-06-30 17:22:51
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