应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家克隆一个基因的全长一般要多久啊
221/1返回列表
查看: 3517  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qaz139687

新虫 (小有名气)

[交流] 大家克隆一个基因的全长一般要多久啊

本人目前在做一个膜蛋白的基因，做了半年只拿到3 RACE的全长  是不是有些基因全长好拿点  有些不好拿啊
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

jiqinger

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-06-26 10:29:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chgjzhyh

金虫 (小有名气)
★
qaz139687(金币+1): 谢谢参与
5‘race 试验比较复杂，所以需要的时间长一点儿，连续做也就一周时间。祝好运！
赞一下 回复此楼
2楼2015-06-26 10:35:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)
★
qaz139687(金币+1): 谢谢参与
送红花一朵
是的
回复此楼
6楼2015-06-26 11:26:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
5‘端是麻烦些，尤其如果5’端有二级结构的。
赞一下 回复此楼
7楼2015-06-26 17:18:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ptttmt

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
OMG，你5端上回不是拿全了嘛？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
9楼2015-06-26 21:06:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by ptttmt at 2015-06-26 21:06:21
OMG，你5端上回不是拿全了嘛？

另外一个基因 肾上腺素受体的。。 感觉有7个跨膜区的都好难做啊
赞一下 回复此楼
10楼2015-06-28 10:53:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by stone2239 at 2015-06-26 17:18:32
5‘端是麻烦些，尤其如果5’端有二级结构的。

做的是G蛋白偶联受体，7次跨膜区的，是不是这种的都特别难做啊- -感觉好累
赞一下 回复此楼
11楼2015-06-28 10:53:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chgjzhyh at 2015-06-26 10:35:56
5‘race 试验比较复杂，所以需要的时间长一点儿，连续做也就一周时间。祝好运！

这么快啊 为啥我做半天老是不出蛋疼，按理论来说我觉得很好做出来的，但每次PCR后跑胶都是没结果，蛋都碎了
赞一下 回复此楼
12楼2015-06-28 10:55:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chgjzhyh

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-06-28 10:55:30
这么快啊 为啥我做半天老是不出蛋疼，按理论来说我觉得很好做出来的，但每次PCR后跑胶都是没结果，蛋都碎了...

5·race 用tuchdown方法来跑，第一个PCR一般跑胶都没有结果，再跑一个巢式PCR应该就有你要的条带了。最后纯化克隆测序，就OK了
赞一下 回复此楼
13楼2015-06-28 16:05:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by chgjzhyh at 2015-06-28 16:05:55
5·race 用tuchdown方法来跑，第一个PCR一般跑胶都没有结果，再跑一个巢式PCR应该就有你要的条带了。最后纯化克隆测序，就OK了...

你是用clontech 的race试剂盒做的吗
赞一下 回复此楼
14楼2015-06-29 12:14:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chgjzhyh

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-06-29 12:14:17
你是用clontech 的race试剂盒做的吗...

invitrogen 的就可以了  pcr扩增就用普通的试剂盒就可以
赞一下 回复此楼
15楼2015-06-29 17:28:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by chgjzhyh at 2015-06-29 17:28:13
invitrogen 的就可以了  pcr扩增就用普通的试剂盒就可以...

PCR扩增就拿普通PCR用的buffer dntp taq酶也可以扩出来吗
赞一下 回复此楼
16楼2015-06-29 20:08:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chgjzhyh

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-06-29 20:08:51
PCR扩增就拿普通PCR用的buffer dntp taq酶也可以扩出来吗...

可以的
回复此楼
17楼2015-06-30 00:41:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by chgjzhyh at 2015-06-30 00:41:32
可以的...

昨天试了下，是可以扩出来，不过就是亮度特别暗，怎么调节程序或者体系呢？程序是自己根据引物设还是按照试剂盒里面的呢
赞一下 回复此楼
18楼2015-06-30 13:01:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chgjzhyh

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
18楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-06-30 13:01:03
昨天试了下，是可以扩出来，不过就是亮度特别暗，怎么调节程序或者体系呢？程序是自己根据引物设还是按照试剂盒里面的呢...

根据自己的引物，以及按照每1kb/min 的扩增延伸时间来估计一下elongation的时间！
赞一下 回复此楼
19楼2015-06-30 21:41:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by chgjzhyh at 2015-06-30 21:41:39
根据自己的引物，以及按照每1kb/min 的扩增延伸时间来估计一下elongation的时间！...

应该不是延伸时间的问题，我估算过大概1000以内，就设了1分钟
赞一下 回复此楼
20楼2015-07-01 09:55:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chgjzhyh

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
20楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-07-01 09:55:27
应该不是延伸时间的问题，我估算过大概1000以内，就设了1分钟...

那就根据你的引物退火温度来设置Tuchdown 的退火温度最高不超过70℃
赞一下 回复此楼
21楼2015-07-01 11:01:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by chgjzhyh at 2015-07-01 11:01:42
那就根据你的引物退火温度来设置Tuchdown 的退火温度最高不超过70℃...

比如退火温度60度，那就设置从68度开始每个循环减少0.5°，一直到60°，然后一直用60°循环？
赞一下 回复此楼
22楼2015-07-01 12:50:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
dmbb3楼
2015-06-26 10:59   回复  
qaz139687(金币+1): 谢谢参与
xiejf4楼
2015-06-26 11:04   回复  
qaz139687(金币+1): 谢谢参与
一
messengermu5楼
2015-06-26 11:21   回复  
qaz139687(金币+1): 谢谢参与
qiaobethy8楼
2015-06-26 19:56   回复  
相关版块跳转 我要订阅楼主 qaz139687 的主题更新
221/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-09-02 00:19 by xiangy672
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭