应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家克隆一个基因的全长一般要多久啊
221/1返回列表
查看: 3266  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qaz139687

新虫 (小有名气)

[交流] 大家克隆一个基因的全长一般要多久啊

本人目前在做一个膜蛋白的基因，做了半年只拿到3 RACE的全长  是不是有些基因全长好拿点  有些不好拿啊
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

jiqinger

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2015-06-26 10:29:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chgjzhyh

金虫 (小有名气)
★
qaz139687(金币+1): 谢谢参与
5‘race 试验比较复杂，所以需要的时间长一点儿，连续做也就一周时间。祝好运！
赞一下 回复此楼
2楼2015-06-26 10:35:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)
★
qaz139687(金币+1): 谢谢参与
送红花一朵
是的
回复此楼
6楼2015-06-26 11:26:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
5‘端是麻烦些，尤其如果5’端有二级结构的。
赞一下 回复此楼
7楼2015-06-26 17:18:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ptttmt

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
OMG，你5端上回不是拿全了嘛？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
9楼2015-06-26 21:06:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by ptttmt at 2015-06-26 21:06:21
OMG，你5端上回不是拿全了嘛？

另外一个基因 肾上腺素受体的。。 感觉有7个跨膜区的都好难做啊
赞一下 回复此楼
10楼2015-06-28 10:53:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by stone2239 at 2015-06-26 17:18:32
5‘端是麻烦些，尤其如果5’端有二级结构的。

做的是G蛋白偶联受体，7次跨膜区的，是不是这种的都特别难做啊- -感觉好累
赞一下 回复此楼
11楼2015-06-28 10:53:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chgjzhyh at 2015-06-26 10:35:56
5‘race 试验比较复杂，所以需要的时间长一点儿，连续做也就一周时间。祝好运！

这么快啊 为啥我做半天老是不出蛋疼，按理论来说我觉得很好做出来的，但每次PCR后跑胶都是没结果，蛋都碎了
赞一下 回复此楼
12楼2015-06-28 10:55:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chgjzhyh

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-06-28 10:55:30
这么快啊 为啥我做半天老是不出蛋疼，按理论来说我觉得很好做出来的，但每次PCR后跑胶都是没结果，蛋都碎了...

5·race 用tuchdown方法来跑，第一个PCR一般跑胶都没有结果，再跑一个巢式PCR应该就有你要的条带了。最后纯化克隆测序，就OK了
赞一下 回复此楼
13楼2015-06-28 16:05:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by chgjzhyh at 2015-06-28 16:05:55
5·race 用tuchdown方法来跑，第一个PCR一般跑胶都没有结果，再跑一个巢式PCR应该就有你要的条带了。最后纯化克隆测序，就OK了...

你是用clontech 的race试剂盒做的吗
赞一下 回复此楼
14楼2015-06-29 12:14:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chgjzhyh

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-06-29 12:14:17
你是用clontech 的race试剂盒做的吗...

invitrogen 的就可以了  pcr扩增就用普通的试剂盒就可以
赞一下 回复此楼
15楼2015-06-29 17:28:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by chgjzhyh at 2015-06-29 17:28:13
invitrogen 的就可以了  pcr扩增就用普通的试剂盒就可以...

PCR扩增就拿普通PCR用的buffer dntp taq酶也可以扩出来吗
赞一下 回复此楼
16楼2015-06-29 20:08:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chgjzhyh

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-06-29 20:08:51
PCR扩增就拿普通PCR用的buffer dntp taq酶也可以扩出来吗...

可以的
回复此楼
17楼2015-06-30 00:41:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by chgjzhyh at 2015-06-30 00:41:32
可以的...

昨天试了下，是可以扩出来，不过就是亮度特别暗，怎么调节程序或者体系呢？程序是自己根据引物设还是按照试剂盒里面的呢
赞一下 回复此楼
18楼2015-06-30 13:01:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chgjzhyh

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
18楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-06-30 13:01:03
昨天试了下，是可以扩出来，不过就是亮度特别暗，怎么调节程序或者体系呢？程序是自己根据引物设还是按照试剂盒里面的呢...

根据自己的引物，以及按照每1kb/min 的扩增延伸时间来估计一下elongation的时间！
赞一下 回复此楼
19楼2015-06-30 21:41:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by chgjzhyh at 2015-06-30 21:41:39
根据自己的引物，以及按照每1kb/min 的扩增延伸时间来估计一下elongation的时间！...

应该不是延伸时间的问题，我估算过大概1000以内，就设了1分钟
赞一下 回复此楼
20楼2015-07-01 09:55:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chgjzhyh

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
20楼: Originally posted by qaz139687 at 2015-07-01 09:55:27
应该不是延伸时间的问题，我估算过大概1000以内，就设了1分钟...

那就根据你的引物退火温度来设置Tuchdown 的退火温度最高不超过70℃
赞一下 回复此楼
21楼2015-07-01 11:01:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by chgjzhyh at 2015-07-01 11:01:42
那就根据你的引物退火温度来设置Tuchdown 的退火温度最高不超过70℃...

比如退火温度60度，那就设置从68度开始每个循环减少0.5°，一直到60°，然后一直用60°循环？
赞一下 回复此楼
22楼2015-07-01 12:50:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
dmbb3楼
2015-06-26 10:59   回复  
qaz139687(金币+1): 谢谢参与
xiejf4楼
2015-06-26 11:04   回复  
qaz139687(金币+1): 谢谢参与
一
messengermu5楼
2015-06-26 11:21   回复  
qaz139687(金币+1): 谢谢参与
qiaobethy8楼
2015-06-26 19:56   回复  
相关版块跳转 我要订阅楼主 qaz139687 的主题更新
221/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭