24小时热门版块排行榜    

查看: 3198  |  回复: 3

kid冰猫

铜虫 (初入文坛)

[求助] WB非特异性条带 已有1人参与

最近做了几批western blot实验,每次显影都出现很多非特异性条带,而且亮度都和目的条带差不多,以前在相同的条件下膜都很干净的,现在完全不知道问题出在哪,请各位大神指教给点建议。这是我显影的图片,非特异性的膜是最近做的,最两边的是MARK,以前MARK也不会被显出来的,另一个是之前做的。

WB非特异性条带
4.jpg


WB非特异性条带-1
`9QZ5Q[J}KS~KFNO[{EN4SD.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

坚定不移往前走~~~~
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
WB非特异性带出现,最可能是脱脂牛奶封闭效果不好,建议使用新的脱脂牛奶,适当加长封闭时间;另外可能是一抗或者二抗清洗效果差,在两次清洗时,请增加清洗时间和清洗次数;还有可能目的蛋白质上样大了,适当减少上样量;还有一抗的专一性可能不够,或者稀释程度不够,换种一抗看看,可能放的时间久了也会有问题,尤其是反复冻融。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2015-06-11 17:39:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kid冰猫

铜虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by calorimetry at 2015-06-11 17:39:26
WB非特异性带出现,最可能是脱脂牛奶封闭效果不好,建议使用新的脱脂牛奶,适当加长封闭时间;另外可能是一抗或者二抗清洗效果差,在两次清洗时,请增加清洗时间和清洗次数;还有可能目的蛋白质上样大了,适当减少上 ...

首先,谢谢指教了
我用的封闭液是5%的BSA,我试过4℃封闭过夜,还是一样的;
我的蛋白上样量只有10ug,相对较少了,而且很疑惑的是之前都做出来了,就最近怎么做都做不出来;
你说的是抗体反复冻融有问题吗?会不会我的蛋白样品本身也有问题,可一般煮过的蛋白都比较稳定了?
坚定不移往前走~~~~
3楼2015-06-15 09:32:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你可以检测一下一抗的活性,我怀疑是一抗或者二抗的问题,或者封闭的问题。

如果蛋白质的抗原免疫簇改变,那么只是结合的特一性的一抗会改变,一般不会引起啊大量的非特异性的识别。而且因为SDS PAGE处理,WB中的蛋白质的抗原免疫簇应该主要是序列免疫决定簇,而不是空间免疫决定簇。所以如果真的是目的蛋白质本身出了问题,很可能是发生了降解或者外源性的蛋白质污染,SDS PAGE不一定都会把不同的蛋白质分离开,检测是否有外源蛋白质污染或者降解,只要测定一下原来成功时的目的蛋白质的红外和紫外光谱,这样样品也不会有损失。

蛋白质上样量过大也可能出现非特异性带。
4楼2015-06-15 13:23:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 kid冰猫 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] O(∩_∩)O +3 q1zg6x4lf3 2026-06-12 3/150 2026-06-13 12:13 by 80j16ujcu8
[考博] T^T +4 jk31rb6vyz 2026-06-12 4/200 2026-06-13 12:09 by 80j16ujcu8
[公派出国] π_π +3 m584r2z4j3 2026-06-11 3/150 2026-06-13 12:04 by 80j16ujcu8
[教师之家] 售SCI文章,我:8.O.5.51O.5.4,科目齐全,可十急 +3 uaz7enpl3v 2026-06-12 4/200 2026-06-13 09:59 by ZYNi吖
[考研] 售SCI文章,我:8.O.5.51O.5.4,科目齐全,可十急 +3 iatmx9xeph 2026-06-12 3/150 2026-06-13 09:49 by elcy61yo4c
[公派出国] 售SCI文章,我:8.O.5.51O.5.4,科目齐全,可十急 +3 uaz7enpl3v 2026-06-12 3/150 2026-06-13 09:22 by t4hz8376wy
[硕博家园] 售SCI文章,我:8.O.5.51O.5.4,科目齐全,可十急 +3 uaz7enpl3v 2026-06-12 3/150 2026-06-13 09:09 by t4hz8376wy
[公派出国] T^T +4 q1zg6x4lf3 2026-06-12 4/200 2026-06-13 08:49 by t4hz8376wy
[考研] T^T +4 m584r2z4j3 2026-06-11 4/200 2026-06-13 08:22 by t4hz8376wy
[硕博家园] 售SCI文章,我:8.O.5.51O.5.4,科目齐全,可十急 +3 x2l6xoh0i3 2026-06-12 3/150 2026-06-13 06:24 by fjz4noejhx
[硕博家园] 售SCI文章,我:8.O.5.51O.5.4,科目齐全,可十急 +3 iatmx9xeph 2026-06-12 3/150 2026-06-13 05:27 by fjz4noejhx
[考研] o>_<o +4 m584r2z4j3 2026-06-11 4/200 2026-06-13 03:49 by 17a9ac4dm7
[硕博家园] T^T +4 m584r2z4j3 2026-06-11 5/250 2026-06-13 03:47 by 17a9ac4dm7
[基金申请] 面上项目没有好文章就没希望了吗? +19 1234567wang 2026-06-07 21/1050 2026-06-12 21:24 by littlezl
[考博] [急招]吉林大学招收26年9月入学考核制博士生1名,截止今晚24点前 +3 hehejin 2026-06-10 4/200 2026-06-12 18:24 by 冻雨天
[教师之家] 重庆理工大学副校长遇刺身亡 传涉案副教授疑因积怨行凶 +6 yexuqing 2026-06-07 7/350 2026-06-12 16:46 by wwwkkk83
[基金申请] 前几天时间戳更新了 +8 vito刘 2026-06-11 13/650 2026-06-12 14:17 by BlakeReary
[教师之家] AASSDDFF +3 m584r2z4j3 2026-06-11 3/150 2026-06-12 11:28 by zs48m4lz8g
[考博] 还有课题组有博士名额吗 +5 冻雨天 2026-06-07 6/300 2026-06-08 20:59 by RCS_tyro
[考博] 博士申请 +3 张城斐 2026-06-07 3/150 2026-06-08 09:15 by A大朋同学
信息提示
请填处理意见