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gigiloveu

铜虫 (小有名气)

[交流] WB条带全出来了· ----各种条带··求分析已有10人参与

今天显影  各种条带都出来了   
会不会是我的抗体浓度太大? 我是10UL抗体稀释到2000ul


[ Last edited by gigiloveu on 2012-6-7 at 15:24 ]
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jiaxinfish

金虫 (正式写手)


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从背景看,就只有泳道有带,说明封闭是对的。
即使抗体浓,也不至于有这么多条带,估计是抗体的特异性不高引起。
5楼2012-06-08 10:30:22
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丸子白菜

铜虫 (正式写手)


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老板知道你1:200稀释,一定会心痛的
10楼2012-06-09 19:40:24
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普通回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

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★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-06-07 21:01:51
看说明书吧上边都有说明,你这才1:200稀释,一般一抗都是上万倍稀释的,你这明显是一抗多了,如果说明书的稀释没问题,就是封闭没有做好
2楼2012-06-07 15:34:40
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qjy_134

铜虫 (小有名气)



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抗体特异性不好,样品少上点或是抗体加大稀释度
3楼2012-06-07 17:41:02
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cfynocry

银虫 (小有名气)

我们都1:1000稀释哈
4楼2012-06-07 18:55:59
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rb

木虫 (著名写手)

小笨虫虫


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1:200虽然稍高了一点,可是也不至于这么多亚。是SC的抗体吧?换一个好点的抗体试试?
寝室楼的大爷、大妈都是哲学家,他们每天都在思考人类最根本的三个问题:你是谁?你从哪儿来?要去哪儿?
6楼2012-06-08 13:32:28
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)


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会不会是二抗加错了,全是非特异性带。我这里有个人出过这样的问题,目的蛋白是小鼠的,一抗是山羊来源的,他二抗用了个抗鼠的,结果是条带全出来了
7楼2012-06-08 17:06:17
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gigiloveu

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 子曰包子好吃 at 2012-06-08 17:06:17
会不会是二抗加错了,全是非特异性带。我这里有个人出过这样的问题,目的蛋白是小鼠的,一抗是山羊来源的,他二抗用了个抗鼠的,结果是条带全出来了

不太可能吧。我的目的蛋白是从人癌细胞提出来的。一抗是兔抗,二抗是羊抗兔。
8楼2012-06-08 17:26:47
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lxyyzz

木虫 (小有名气)


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估计是一抗的特异性不行。。你对下分子量,看看你要的蛋白有没有啊
9楼2012-06-08 20:36:41
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