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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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五一长假

铜虫 (小有名气)

[交流] 怎么能够排除菌落PCR假阳性 已有5人参与

如题   菜鸟求助  ,尽量详细一点。
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185121481

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
选用插入基因的其中一条引物+载体上的一条引物

只要不使用你目的基因的2条引物,一般不会出现假阳
2楼2015-06-09 16:54:20
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yangjingjing

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
同意载体+插入片段引物,建议加个单纯载体作为阴性对照~
插入片段小的话载体正反引物+插入片段正反引物复测,祝你好运
努力打败一切
3楼2015-06-10 10:18:13
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表弟爱网游

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
插入片段如果是PCR片段,用扩增引物做菌液PCR的引物,或者自己再设计一对特异引物,在目的序列上找一段特异的序列,设置一个空载对照,出现假阳性的几率就比较少了。实在不行就做蓝白斑筛选吧
当一切如飞舞的落叶坠落,惋惜之余,也要学会原谅与释怀
4楼2015-06-10 18:17:26
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zliean

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
载体上游加目的片段下游
5楼2015-06-10 21:18:55
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我都是用载体两端的测序引物PCR的。很有效。空载大约100bp。
6楼2015-06-13 00:01:07
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