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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 怎么能够排除菌落PCR假阳性
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五一长假

铜虫 (小有名气)

[交流] 怎么能够排除菌落PCR假阳性 已有5人参与

如题   菜鸟求助  ，尽量详细一点。
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1楼 2015-06-09 11:13:58
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185121481

新虫 (初入文坛)
★
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选用插入基因的其中一条引物+载体上的一条引物

只要不使用你目的基因的2条引物，一般不会出现假阳
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2楼2015-06-09 16:54:20
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yangjingjing

木虫 (正式写手)
★
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同意载体+插入片段引物，建议加个单纯载体作为阴性对照~
插入片段小的话载体正反引物+插入片段正反引物复测，祝你好运
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努力打败一切
3楼2015-06-10 10:18:13
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表弟爱网游

金虫 (小有名气)
★
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插入片段如果是PCR片段，用扩增引物做菌液PCR的引物，或者自己再设计一对特异引物，在目的序列上找一段特异的序列，设置一个空载对照，出现假阳性的几率就比较少了。实在不行就做蓝白斑筛选吧
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当一切如飞舞的落叶坠落，惋惜之余，也要学会原谅与释怀
4楼2015-06-10 18:17:26
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zliean

金虫 (小有名气)
★
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载体上游加目的片段下游
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5楼2015-06-10 21:18:55
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)
★
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我都是用载体两端的测序引物PCR的。很有效。空载大约100bp。
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6楼2015-06-13 00:01:07
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