| 查看: 1239 | 回复: 9 | |||
linglingys新虫 (小有名气)
|
[交流]
酶切结果求解
|
|
本人做双酶切 Fermentas Fast Digestion 63-1-B/ 63-1-H B：EcoRI/BamHI H: EcoRI/HindⅢ 63-1质粒浓度：1.5ug/ul water 15.3ul 10X FastDigest 2ul DNA(ug) 0.7ul FastDigest enzyme1 1ul FastDigest enzyme2 1ul Total volume 20ul 37℃ for 12hours 63-2-B/ 63-2-H B：EcoRI/BamHI H: EcoRI/HindⅢ 63-2质粒浓度：1.1ug/ul water 15ul 10X FastDigest 2ul DNA(ug) 1ul FastDigest enzyme1 1ul FastDigest enzyme2 1ul Total volume 20ul 37℃ for 12hours 原质粒：二次洗脱(取1ul+9ul无核酸水+1ul 10X Loading buffer)(质粒浓度63-1原:0.3ug/ul，63-2原:0.13ug/ul) Marker：DL5000 问题： B：EcoRI/BamHI 双酶切怎么又这么多片段，是酶切时间过长吗？另外EcoRI/HindⅢ 小片段应该是1500bp左右的，为什么实际看到是2000-3000bp之间呢？备注：质粒经测序鉴定转染成功的。  63-1.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有120人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助！双酶切验证总切出来四条带，请亲们帮忙看看，非常着急啊！谢谢大家了！
已经有32人回复
- Ecor Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切结果，目的条带有，可是另一条带比原来质粒还要大，怎么解释呢
已经有6人回复
- 酶切后跑出的条带这个样子，是酶的问题吗
已经有6人回复
- 求助：质粒酶切问题，质粒被切飞了啊！！
已经有24人回复
- Takara的BamHI和XhoI双酶切求助
已经有6人回复
- 单酶切失败。质粒验证显示正确，但是PCR验证与酶切验证出现很多问题，麻烦大家解决下
已经有4人回复
- 纠结的分子实验，双酶切连不上，求助
已经有14人回复
- 求助--双酶切连接构质粒
已经有15人回复
- 电泳Maker 为什么要用λ-DNA 的酶切片段呢
已经有5人回复
- 质粒酶切拖尾，附图。
已经有3人回复
- 为什么酶切会出现这种情况，请各位好人帮忙解答
已经有10人回复
- 重组质粒单双酶切结果一样，奇怪了的……
已经有15人回复
- 单酶切两条带？
已经有6人回复
- 我构建质粒后酶切验证的问题
已经有13人回复
- 目的片段中含有酶切位点，求解决方案
已经有3人回复
- 求助：重组质粒酶切问题！请大家帮我解决一下，急！
已经有7人回复
- pAN7-1质粒分析
已经有18人回复
- 环形质粒酶切电泳图分析求解
已经有25人回复
- 【求助/交流】部分酶切的电泳图不知为何成这个样子？有经验的虫虫们帮忙解释一下吧！
已经有10人回复
- 【求助/交流】质粒，酶切前比酶切后跑的还快，神了？？！！！
已经有15人回复
- 【求助/交流】急！！！！酶切位点切不开
已经有8人回复
- 【求助/交流】Xhol 酶切不能切开
已经有13人回复
lansong9783
金虫 (小有名气)
- 应助: 26 (小学生)
- 金币: 1479.1
- 红花: 2
- 帖子: 127
- 在线: 53.9小时
- 虫号: 416691
- 注册: 2007-06-30
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
2楼2015-06-03 00:44:17
luwei13566
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 184 (高中生)
- 金币: 4352.9
- 散金: 97
- 红花: 35
- 帖子: 641
- 在线: 261.1小时
- 虫号: 2380655
- 注册: 2013-03-27
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2015-06-03 11:21:32
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2015-06-03 11:21:32
|
切割时间太长了！明显给切花掉了~~至于切出带偏大 1.你的重组质粒大小正确吗？~确定是你的质粒无误~？ 2. 你63-1-H那个点样孔，最上面那条亮带是空载体的带吗？如果不是你载体的位置的话，你2000—3000的条带不一定是你双酶切出来的基因带，更像是Star活性切出来的带。LZ你的空载质粒多大？ 3.LZ你为什么要用快切酶37度12个小时处理呢？说明书上肯定不会这么写把，是因为以前尝试过短时间切割，切不出来带吗？我感觉你还是好好检查一下那个质粒是否是你筛出来的重组质粒~一般从载体上切基因很好切的，这几个内切酶也不太受甲基化的影响。如果切不开除非没有酶切位点或者你的酶切位点本身有问题。 |
3楼2015-06-03 01:25:58
阿Q~~
至尊木虫 (文坛精英)
- 应助: 77 (初中生)
- 金币: 33343.6
- 红花: 107
- 帖子: 36186
- 在线: 1028.1小时
- 虫号: 3237212
- 注册: 2014-05-27
- 性别: MM
- 专业: 宇宙学
4楼2015-06-03 07:42:54
linglingys
新虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1304
- 散金: 35
- 红花: 6
- 帖子: 261
- 在线: 70.6小时
- 虫号: 2495787
- 注册: 2013-06-04
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
5楼2015-06-03 08:04:51
luwei13566
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 184 (高中生)
- 金币: 4352.9
- 散金: 97
- 红花: 35
- 帖子: 641
- 在线: 261.1小时
- 虫号: 2380655
- 注册: 2013-03-27
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
6楼2015-06-03 10:04:20
siriusxuan
木虫 (正式写手)
- 应助: 50 (小学生)
- 金币: 1830
- 散金: 207
- 红花: 7
- 帖子: 509
- 在线: 151.5小时
- 虫号: 1992629
- 注册: 2012-09-11
- 专业: 生物化学
7楼2015-06-03 15:50:21
linglingys
新虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1304
- 散金: 35
- 红花: 6
- 帖子: 261
- 在线: 70.6小时
- 虫号: 2495787
- 注册: 2013-06-04
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
8楼2015-06-04 14:30:05
linglingys
新虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1304
- 散金: 35
- 红花: 6
- 帖子: 261
- 在线: 70.6小时
- 虫号: 2495787
- 注册: 2013-06-04
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
9楼2015-06-04 14:30:42
linglingys
新虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1304
- 散金: 35
- 红花: 6
- 帖子: 261
- 在线: 70.6小时
- 虫号: 2495787
- 注册: 2013-06-04
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
10楼2015-06-04 14:31:13
投票:
20