应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 网络生活区 » 有奖问答 » 学术帮助 » 质粒pcr为阳性，但酶切没有出现目的片段
31/1返回列表
查看: 948  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 博学EPI ，点击这里进行查看

502015088_

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒pcr为阳性，但酶切没有出现目的片段

想请教一下各位虫友：

      我把我需要的两个基因连接到表达载体上（先连接的300bp大小的基因，测序正确后再连接的1885bp大小的基因），通过菌落PCR鉴定为阳性的菌落在进行质粒提取，后

进行质粒PCR为阳性。而对该质粒进行酶切，却没有出现目的条带（1885kb）。这是什么原因呢？

质粒pcr为阳性，但酶切没有出现目的片段
pKSV7-p43-REC质粒PCR.jpg


质粒pcr为阳性，但酶切没有出现目的片段-1
酶切
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-05-30 12:32:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l1012003

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
502015088_: 金币+2, 博学EPI+1, ★有帮助 2015-06-01 17:27:18
首先，确定你的目的基因真的连上去了，菌落pcr也有可能出现假阳性的结果，而且你还是两次加的基因，建议你单独用载体试一试！看能不能酶切成功！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
2楼2015-05-30 13:46:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

502015088_

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by l1012003 at 2015-05-30 13:46:06
首先，确定你的目的基因真的连上去了，菌落pcr也有可能出现假阳性的结果，而且你还是两次加的基因，建议你单独用载体试一试！看能不能酶切成功！

虫友，你好！我说一下我的具体实验步骤，你帮我看一下疑问出现在哪里。

首先，我用EcoRI和BamHI酶切我的上游基因（300bp）和质粒骨架（P），连接后转化到大肠杆菌中，挑单菌落进行菌落PCR阳性后在提质粒(P1)进行质粒PCR，结果为阳性，送出去测序，测序结果正确。后再用BamHI和HindIII对质粒(P1)和我的下游基因（1885bp)进行酶切，连接后转化到大肠杆菌中，挑单菌落进行菌落PCR阳性后在提取质粒（P3），质粒PCR为阳性（图一）。后送出去测序说测序没有信号，测序用的是上游基因的上游引物和下游基因的下游引物。后对P3质粒进行酶切，没有下游基因（1885bp片段）。
赞一下 回复此楼
3楼2015-06-01 10:34:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 502015088_ 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-16 15:24 by i3KBRD19ERkG
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +7 recruit123 2026-09-09 7/350 2026-09-16 15:07 by 防腐剂科技部
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-16 06:24 by LH5NkK5Ud4bh
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-16 05:51 by LH5NkK5Ud4bh
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 05:35 by LH5NkK5Ud4bh
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-16 04:27 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-16 03:59 by DgNGHc3h5tPl
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 03:50 by DgNGHc3h5tPl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-16 03:14 by DgNGHc3h5tPl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:14 by zNcEhTcH7ihq
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:23 by CgyNCDVNhGVg
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:59 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-15 16:26 by CgyNCDVNhGVg
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 7/350 2026-09-15 14:49 by VMDqgnlKimtZ
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 9/450 2026-09-15 14:10 by VMDqgnlKimtZ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 08:02 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:50 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
[基金申请] 求教各位大神：2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀？ +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭