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质粒串联表达,第二个基因一直连接不上,而且现象奇怪 已有2人参与
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最近遇到怪事,本人现在正在做两个基因的串联表达,所用的表达载体是实验室自己构建的 首先串联第一个基因A,比较顺利的连接上 再串联第二个基因B,一直连不上,但是每次转化平板总是长很多转化子,但是挑出来都是假阳性,检查过酶切位点都没有什么问题 本来怀疑是第一个串联了A基因的质粒保存出现了问题,然后提质粒,酶切,PCR都显示质粒没问题 再串联B时挑取转化子,用A的上游和B的下游P显示为假阳性, ![]() 没有条带,但是很奇怪的是用A的上下游P也没有条带,按理说空载也是带有A基因的载体呀!这是怎么回事 苦恼! |
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