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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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超级版主

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[求助] 质粒串联表达,第二个基因一直连接不上,而且现象奇怪 已有2人参与

最近遇到怪事,本人现在正在做两个基因的串联表达,所用的表达载体是实验室自己构建的
首先串联第一个基因A,比较顺利的连接上
再串联第二个基因B,一直连不上,但是每次转化平板总是长很多转化子,但是挑出来都是假阳性,检查过酶切位点都没有什么问题
本来怀疑是第一个串联了A基因的质粒保存出现了问题,然后提质粒,酶切,PCR都显示质粒没问题
再串联B时挑取转化子,用A的上游和B的下游P显示为假阳性,没有条带,但是很奇怪的是用A的上下游P也没有条带,按理说空载也是带有A基因的载体呀!这是怎么回事 苦恼!
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viki_MDK

超级版主

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
那试一试 先把两个基因PCR先融合起来,在连接表达质粒。
2楼2015-05-19 09:08:15
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404160169

兑换贵宾

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【答案】应助回帖

我们基因串联表达,酶切,酶连都很正常 你要确定你选的酶切位点的酶是否有甲基化现象,酶切条件是否正常。
3楼2015-11-17 16:35:58
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