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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因连pMA5质粒，转入JM109后，提完质粒跑胶验证，结果大小只有3000多，求原因
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crazy墨汁

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因连pMA5质粒，转入JM109后，提完质粒跑胶验证，结果大小只有3000多，求原因

pMA5质粒，转入JM109后，提完质粒跑胶验证，结果大小只有3000多，求原因？？？
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1楼 2013-07-29 19:36:55
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overhalfmoon

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-29 20:37:07
有的细菌有重组酶，会把载体整合到基因组去。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2013-07-29 20:10:30
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huanghznd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
crazy墨汁(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-30 10:14:05
crazy墨汁: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-07-30 15:35:57
质粒有超螺旋现象，真正的质粒大小最好用单酶切，质粒线性化后，才能确定其大小。最好以空载的线性化质粒为对照。
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3楼2013-07-30 09:29:39
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crazy墨汁

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by huanghznd at 2013-07-30 09:29:39
质粒有超螺旋现象，真正的质粒大小最好用单酶切，质粒线性化后，才能确定其大小。最好以空载的线性化质粒为对照。

我把质粒单双酶切了，基因一千多也看到了，但是感觉质粒大小小了一点
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4楼2013-07-30 15:37:01
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crazy墨汁

新虫 (初入文坛)
前面两个是MARKER,后面是我的单双酶切
基因连pMA5质粒，转入JM109后，提完质粒跑胶验证，结果大小只有3000多，求原因
UVP13620July292013.JPG
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5楼2013-07-30 15:38:48
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huanghznd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-30 20:37:11
引用回帖:
5楼: Originally posted by crazy墨汁 at 2013-07-30 15:38:48
前面两个是MARKER,后面是我的单双酶切

UVP13620July292013.JPG

如你所说，图中酶切后泳道中小的那个是你的目的条带1000多点。如果你的基因是从质粒的MCS位置插入的话，可以比较肯定的是空载质粒跟你插入的质粒是不同的。图中都没怎么跑开就有可以看出差别了，如果再跑长一点，差别应该还会再明显。建议LZ重新做吧。第二个Marker是DL2000吧？
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6楼2013-07-30 16:09:24
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crazy墨汁

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by huanghznd at 2013-07-30 16:09:24
如你所说，图中酶切后泳道中小的那个是你的目的条带1000多点。如果你的基因是从质粒的MCS位置插入的话，可以比较肯定的是空载质粒跟你插入的质粒是不同的。图中都没怎么跑开就有可以看出差别了，如果再跑长一点，差 ...

恩，后来又跑了一会，确实质粒小了将近有两千大小，但是为什么会出现这种情况呢？
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7楼2013-07-30 16:35:07
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xz2001199802

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-30 20:37:37
一，没跑开，时间应该更长些，二，你的markers选择不合适，所有很难说是小了， 三，换其他的酶切切，确定是否真的小了
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越学越无知
8楼2013-07-30 17:40:15
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