24小时热门版块排行榜    

查看: 1447  |  回复: 2

下一个百度

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒串联表达,第二个基因一直连接不上,而且现象奇怪 已有2人参与

最近遇到怪事,本人现在正在做两个基因的串联表达,所用的表达载体是实验室自己构建的
首先串联第一个基因A,比较顺利的连接上
再串联第二个基因B,一直连不上,但是每次转化平板总是长很多转化子,但是挑出来都是假阳性,检查过酶切位点都没有什么问题
本来怀疑是第一个串联了A基因的质粒保存出现了问题,然后提质粒,酶切,PCR都显示质粒没问题
再串联B时挑取转化子,用A的上游和B的下游P显示为假阳性,没有条带,但是很奇怪的是用A的上下游P也没有条带,按理说空载也是带有A基因的载体呀!这是怎么回事 苦恼!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

viki_MDK

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
那试一试 先把两个基因PCR先融合起来,在连接表达质粒。
2楼2015-05-19 09:08:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

404160169

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我们基因串联表达,酶切,酶连都很正常 你要确定你选的酶切位点的酶是否有甲基化现象,酶切条件是否正常。
3楼2015-11-17 16:35:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 下一个百度 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854复试调剂 276 +4 wmm9 2026-03-01 5/250 2026-03-02 06:41 by 汪!?!
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[考研] 求调剂 +5 yunziaaaaa 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:57 by ccp273206157
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:31 by L135790
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +3 Qwertyuop 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:18 by aaadim
[考研] 0856求调剂285 +10 吕仔龙 2026-02-28 10/500 2026-03-01 21:37 by 公瑾逍遥
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 材料284求调剂,一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
信息提示
请填处理意见