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NSDSKY_LZM

金虫 (小有名气)

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[求助] 做的TA克隆，一直连不上已有5人参与

最近在做TA克隆，用的全式金的PMD19-T载体，我的目的基因片段为300bp左右，浓度为30ng/ul，体系为 DNA 4.5ul，solutionI 5ul，PMD19-t 0.5ul，16℃过夜，用的感受态为Trans1-t1，菌落PCR，没有见到我的目的条带，已经挑取10多个菌落了，都没有，这是为什么？

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1楼2015-04-23 16:08:12

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墨尔本机器

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★
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NSDSKY_LZM(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-29 18:45:52

同学，你用的产品、体系都没问题，我一直有做，和你用的试剂也一样。
给你点建议你参考一下：自己的DNA浓度或者质量提高一下（重新PCR，多做几管浓缩等），PMD-19T加至0.8微升。

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2楼2015-04-23 16:48:50

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NSDSKY_LZM

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2楼: Originally posted by 墨尔本机器 at 2015-04-23 16:48:50
同学，你用的产品、体系都没问题，我一直有做，和你用的试剂也一样。
给你点建议你参考一下：自己的DNA浓度或者质量提高一下（重新PCR，多做几管浓缩等），PMD-19T加至0.8微升。

那DNA加多少？你的DNA浓度是多少？

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3楼2015-04-26 16:20:18

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