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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 做的TA克隆，一直连不上
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NSDSKY_LZM

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 393658000 at 2015-04-27 14:42:18
你用的什么酶做PCR

takara的2×Taq master Mix
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11楼2015-04-27 16:24:17
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横卧沙丘

新虫 (初入文坛)
DNA纯度高吗

[ 发自小木虫客户端 ]
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12楼2015-04-27 16:50:07
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yxlijian

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果实在做不出来，建议换无缝克隆技术构建重组质粒！效率高，速度快！就是价格贵点！

[ 发自小木虫客户端 ]
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13楼2015-04-27 16:58:24
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NSDSKY_LZM

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 横卧沙丘 at 2015-04-27 16:50:07
DNA纯度高吗

你说的是260/280吧，在1.7几左右
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14楼2015-04-27 17:11:59
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393658000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by NSDSKY_LZM at 2015-04-27 16:24:17
takara的2×Taq master Mix...

PCR带A了，没理由TA克隆做不上去了，个人建议，换个平端载体，PCR平末端连接

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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15楼2015-04-28 00:15:08
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qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 393658000 at 2015-04-28 00:15:08
PCR带A了，没理由TA克隆做不上去了，个人建议，换个平端载体，PCR平末端连接
...

请问一下我一直都是这样做的，但是有个问题，每次连接转化之后，先用没有氨苄的培养基摇菌培养1小时，然后离线去掉上清，涂平板，蓝白斑筛选，37摄氏度培养16小时候，放冰箱N小时后，总是没有蓝的这是为啥？还有挑菌后，用氨苄培养基摇菌，为什么我的菌液老是沉在底部，都不是浑浊的，而且量很难变多，能不能上传一张涂平板后的图片给我看看是着么样的，谢谢
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16楼2015-04-29 09:28:36
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91candy

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

solutionI 5ul       这个是什么？我一直都是加基因和载体，不加别的了。

载体和基因有一个最佳反应摩尔比，不知道你考虑没有。
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17楼2015-08-26 15:44:36
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