应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 做的TA克隆，一直连不上
172/2返回列表上一页12
查看: 2058  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

NSDSKY_LZM

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 393658000 at 2015-04-27 14:42:18
你用的什么酶做PCR

takara的2×Taq master Mix
赞一下 回复此楼
11楼2015-04-27 16:24:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

横卧沙丘

新虫 (初入文坛)
DNA纯度高吗

[ 发自小木虫客户端 ]
回复此楼
12楼2015-04-27 16:50:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxlijian

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果实在做不出来，建议换无缝克隆技术构建重组质粒！效率高，速度快！就是价格贵点！

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
13楼2015-04-27 16:58:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

NSDSKY_LZM

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 横卧沙丘 at 2015-04-27 16:50:07
DNA纯度高吗

你说的是260/280吧，在1.7几左右
赞一下 回复此楼
14楼2015-04-27 17:11:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

393658000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by NSDSKY_LZM at 2015-04-27 16:24:17
takara的2×Taq master Mix...

PCR带A了，没理由TA克隆做不上去了，个人建议，换个平端载体，PCR平末端连接

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
15楼2015-04-28 00:15:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 393658000 at 2015-04-28 00:15:08
PCR带A了，没理由TA克隆做不上去了，个人建议，换个平端载体，PCR平末端连接
...

请问一下我一直都是这样做的，但是有个问题，每次连接转化之后，先用没有氨苄的培养基摇菌培养1小时，然后离线去掉上清，涂平板，蓝白斑筛选，37摄氏度培养16小时候，放冰箱N小时后，总是没有蓝的这是为啥？还有挑菌后，用氨苄培养基摇菌，为什么我的菌液老是沉在底部，都不是浑浊的，而且量很难变多，能不能上传一张涂平板后的图片给我看看是着么样的，谢谢
赞一下 回复此楼
16楼2015-04-29 09:28:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

91candy

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

solutionI 5ul       这个是什么？我一直都是加基因和载体，不加别的了。

载体和基因有一个最佳反应摩尔比，不知道你考虑没有。
赞一下 回复此楼
17楼2015-08-26 15:44:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 NSDSKY_LZM 的主题更新
172/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 3/150 2026-09-15 10:02 by VMDqgnlKimtZ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 09:38 by VMDqgnlKimtZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:50 by C79jjtjAKjEn
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:34 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:50 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-15 06:49 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-15 05:49 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-15 05:00 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 01:21 by mibUvS8DDCwf
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 23:13 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:36 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:25 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭