应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 做的TA克隆，一直连不上
52/1返回列表
查看: 2068  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

NSDSKY_LZM

金虫 (小有名气)

[求助] 做的TA克隆，一直连不上 已有5人参与

最近在做TA克隆，用的全式金的PMD19-T载体，我的目的基因片段为300bp左右，浓度为30ng/ul，体系为 DNA 4.5ul，solutionI 5ul，PMD19-t 0.5ul，16℃过夜，用的感受态为Trans1-t1，菌落PCR，没有见到我的目的条带，已经挑取10多个菌落了，都没有，这是为什么？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-04-23 16:08:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 393658000 at 2015-04-28 00:15:08
PCR带A了，没理由TA克隆做不上去了，个人建议，换个平端载体，PCR平末端连接
...

请问一下我一直都是这样做的，但是有个问题，每次连接转化之后，先用没有氨苄的培养基摇菌培养1小时，然后离线去掉上清，涂平板，蓝白斑筛选，37摄氏度培养16小时候，放冰箱N小时后，总是没有蓝的这是为啥？还有挑菌后，用氨苄培养基摇菌，为什么我的菌液老是沉在底部，都不是浑浊的，而且量很难变多，能不能上传一张涂平板后的图片给我看看是着么样的，谢谢
赞一下 回复此楼
16楼2015-04-29 09:28:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

墨尔本机器

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
NSDSKY_LZM(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-29 18:45:52
同学，你用的产品、体系都没问题，我一直有做，和你用的试剂也一样。
给你点建议你参考一下：自己的DNA浓度或者质量提高一下（重新PCR，多做几管浓缩等），PMD-19T加至0.8微升。
赞一下 回复此楼
2楼2015-04-23 16:48:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

NSDSKY_LZM

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 墨尔本机器 at 2015-04-23 16:48:50
同学，你用的产品、体系都没问题，我一直有做，和你用的试剂也一样。
给你点建议你参考一下：自己的DNA浓度或者质量提高一下（重新PCR，多做几管浓缩等），PMD-19T加至0.8微升。

那DNA加多少？你的DNA浓度是多少？
赞一下 回复此楼
3楼2015-04-26 16:20:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

墨尔本机器

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by NSDSKY_LZM at 2015-04-26 16:20:18
那DNA加多少？你的DNA浓度是多少？...

DNA4.5微，浓度80的，链接是高一点成功率高
赞一下 回复此楼
4楼2015-04-26 17:14:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭