| 查看: 1408 | 回复: 3 | ||
[求助]
TA克隆电击法转化的步骤
|
| 现在在做克隆文库，考虑用电击法转化，模板是从土样中提取的DNA然后细菌全长PCR扩增，切胶回收，用pmd-18T载体连接，转化到大肠杆菌细胞中，希望每皿的转化子可达100到200个，求成熟稳定的电击转化参数和步骤 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有73人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 表达已知序列，有必要做TA克隆吗
已经有11人回复
- 我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的
已经有31人回复
- TA克隆测序结果老是显示空载，这是为什么呢？？
已经有11人回复
- 生工Taq+Pfu酶做TA克隆效果
已经有4人回复
- TA克隆为什么总是假阳性啊？
已经有39人回复
- TA克隆为什么长一片啊
已经有18人回复
- 虫子们有谁做过TA克隆呀？额想知道TA克隆的具体的实验步骤
已经有25人回复
- TA克隆遇到的问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】分类鉴定的时候，为什么pcr之后还要做TA克隆，转化，然后将序列测序呢？
已经有5人回复
- 【求助/交流】用top10菌株做的感受态能否用于TA克隆？
已经有6人回复
- 【分享】农杆菌感受态制备和转化方法
已经有19人回复
- 【求助/交流】TA克隆连接转化后的产物保存多长时间？
已经有5人回复
- 【求助/交流】PCR产物切胶回收后可不可以加A尾,做TA克隆，急！希望高手们能帮帮忙！
已经有9人回复
- 【求助/交流】TA克隆为什么会长出蓝斑
已经有4人回复
- 【求助/交流】大家做TA克隆、蓝白斑筛选用什么样的感受态细胞？
已经有20人回复
_小小鸟
金虫 (正式写手)
御林军
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 1261.5
- 散金: 99
- 红花: 9
- 帖子: 451
- 在线: 230.5小时
- 虫号: 1687581
- 注册: 2012-03-13
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
yuanyuan0827(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-18 17:18:58
感谢参与，应助指数 +1
yuanyuan0827(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-18 17:18:58
|
1. 40微升感受态，于0.5ml离心管中，冰上 2、加入待转化样品（1~2微升），冰上30~60s 3、调节电击仪，电脉冲25微F，电压2.5KV，电阻200欧姆 4、将样品放入电击杯内，电击杯放入电击仪 5、按上述设定的参数，启动对细胞的电脉冲（电场强度约为12.5kv/CM） 6、结束后尽快取出，室温下加入1ml SOC培养液 7、37度低速震荡培养1h 8、取不同量菌液（经验值100微）涂布到平板上（X-gal，2%，40微升；IPTG，20%，7微升，/平板） |
2楼2013-04-18 17:17:39
3楼2013-04-19 16:03:00
4楼2013-06-20 11:09:02
5