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TA克隆电击法转化的步骤
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| 现在在做克隆文库，考虑用电击法转化，模板是从土样中提取的DNA然后细菌全长PCR扩增，切胶回收，用pmd-18T载体连接，转化到大肠杆菌细胞中，希望每皿的转化子可达100到200个，求成熟稳定的电击转化参数和步骤 |
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_小小鸟
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御林军
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
yuanyuan0827(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-18 17:18:58
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1. 40微升感受态，于0.5ml离心管中，冰上 2、加入待转化样品（1~2微升），冰上30~60s 3、调节电击仪，电脉冲25微F，电压2.5KV，电阻200欧姆 4、将样品放入电击杯内，电击杯放入电击仪 5、按上述设定的参数，启动对细胞的电脉冲（电场强度约为12.5kv/CM） 6、结束后尽快取出，室温下加入1ml SOC培养液 7、37度低速震荡培养1h 8、取不同量菌液（经验值100微）涂布到平板上（X-gal，2%，40微升；IPTG，20%，7微升，/平板） |
2楼2013-04-18 17:17:39
3楼2013-04-19 16:03:00
4楼2013-06-20 11:09:02
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