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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » PAGE后转膜为什么转着转着连Maker都没了呢
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ssssss128

木虫 (正式写手)

[求助] PAGE后转膜为什么转着转着连Maker都没了呢 已有3人参与

PAGE后转膜为什么转着转着连Maker都没了呢？？？？？

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1楼 2015-04-16 15:08:29
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ssssss128: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-04-18 22:28:19
膜上是否有目的蛋白存在？只是MARK没了，还是白版一块？信息太少，只能提几个建议：
1.确定装置是否有问题
2.转膜时间是否有问题，正常的Marker，转1~2h就差不多了
3.转膜以前平衡的是否充分
4.转印槽冰浴的效果过怎么样
与WB有关的问题可以到这个上面看看：WesternBlot常见问题FAQ
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

ssssss128
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
2楼2015-04-17 10:15:16
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ssssss128

木虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-04-17 10:15:16
膜上是否有目的蛋白存在？只是MARK没了，还是白版一块？信息太少，只能提几个建议：
1.确定装置是否有问题
2.转膜时间是否有问题，正常的Marker，转1~2h就差不多了
3.转膜以前平衡的是否充分
4.转印槽冰浴的效果 ...

谢谢您！maker和样都没出来，可能是转的时候没弄好，弄到膜上膜还弄破了一点，后面的步骤不是很熟悉，还在摸索

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2015-04-17 11:19:03
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魅冉findy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是放反了，或者是你夹的时候移动位置过大，或者是分子量小的蛋白转的时间太久，转出去了，再不就是转的时候膜用了不合适的规格。最可能就是黑色电极对黑色面

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ssssss128
细语低声如梦，清浅带绵。
4楼2015-04-18 20:28:06
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694839002

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是装置放反和时间2个问题，分别再尝试下
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ssssss128
PTMproteomicsisthefutureoflifescicence http://www.ptm-biolab.com.cn/
5楼2015-04-18 21:46:41
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ssssss128

木虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 魅冉findy at 2015-04-18 20:28:06
应该是放反了，或者是你夹的时候移动位置过大，或者是分子量小的蛋白转的时间太久，转出去了，再不就是转的时候膜用了不合适的规格。最可能就是黑色电极对黑色面
...

电极放对了，可能是膜的问题，请问您用的是什么膜呢？分子量是65k的，第二次做在滤纸上看到了marker

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6楼2015-04-18 22:25:55
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ssssss128

木虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 694839002 at 2015-04-18 21:46:41
应该是装置放反和时间2个问题，分别再尝试下

请问分子量是65k的用多大电流呢？还是用电压？我们采用的是200mA.1小时，你用的膜是哪个牌子的呢？

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7楼2015-04-18 22:27:40
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694839002

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by ssssss128 at 2015-04-18 22:27:40
请问分子量是65k的用多大电流呢？还是用电压？我们采用的是200mA.1小时，你用的膜是哪个牌子的呢？
...

65kDa不算大，现在应该确定下是没转上 还是转过头了。我们用bio rad的半干转，1-1.5h，差不多，湿转时间长一点；用膜NC和PVDF都可以。还有三明治是否对准了。一般转膜不是wb里容易出问题的地方
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PTMproteomicsisthefutureoflifescicence http://www.ptm-biolab.com.cn/
8楼2015-04-19 14:03:43
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