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afen2004

新虫 (小有名气)

[求助] 湿法转膜转不上去。

蛋白分子量约20-25KD,湿法转膜,北京六一的转膜仪,ferment的marker但转不上去,marker和目的蛋白都转不上去。150mA2-2.5小时,转后的胶胶考马斯亮蓝染色,是空白。求助!
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afen2004

新虫 (小有名气)

刚才忘了补充,是PVDF膜,0.45um.
2楼2013-08-06 16:26:11
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jiang701820

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助! 2013-08-07 09:17:00
afen2004: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-08-10 11:59:28
胶上还有marker么?如果胶上也没有marker了说明你正负极插反了,蛋白全部转到滤纸上去了;另外你把电流调到150mA的时候电压是多少?转膜液(3.03g trisbase,14.4g 甘氨酸,200ml甲醇,加超纯水至1L)是否配错?如果这些都没问题的话可能你转膜的时候三明治没做好。另外,20-25kda不需要转那么长时间,我们一般200mA(2块胶)转1个小时,大一点的就转1个半小时,超过200kda转2个小时,一般都没有问题。good luck!
3楼2013-08-06 23:23:08
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afen2004

新虫 (小有名气)

谢谢!电极,缓冲液,三明治等都没有问题,下次再摸索一下200mA一个小时。
4楼2013-08-10 11:58:26
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

肯定是转的方向反了, 要是你不确定什么顺序是正确的, 下次你可以在胶的两面各放一张膜.
5楼2013-08-10 19:43:22
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