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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做电转移的时候，Marker为什么转不到硝酸纤维膜上啊
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Xushufen0916

铁虫 (初入文坛)

[求助] 做电转移的时候，Marker为什么转不到硝酸纤维膜上啊

请教各位高手啊。我做蛋白质电转实验的时候，凝胶上的Marker为什么不能转到硝酸纤维膜上啊。电转完成后，把凝胶拿去考马斯亮蓝染色，发现胶上也没点了。那这些点究竟转到哪里去了呢。
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1楼 2011-04-20 15:11:45
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

Xushufen0916(金币+1): 2011-04-21 09:15:20
引用回帖:
Originally posted by Xushufen0916 at 2011-04-20 15:11:45:
请教各位高手啊。我做蛋白质电转实验的时候，凝胶上的Marker为什么不能转到硝酸纤维膜上啊。电转完成后，把凝胶拿去考马斯亮蓝染色，发现胶上也没点了。那这些点究竟转到哪里去了呢。

蛋白点不是转到PVDF膜上去了么？
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
2楼2011-04-20 15:17:28
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Xushufen0916

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2011-04-20 15:17:28:
蛋白点不是转到PVDF膜上去了么？

啊？真纠结，做了不下10次了。现在我得试试看蛋白点能不能转到NC膜上。
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3楼2011-04-20 15:25:18
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

Xushufen0916(金币+5): 2011-04-21 09:14:12
引用回帖:
Originally posted by Xushufen0916 at 2011-04-20 15:11:45:
请教各位高手啊。我做蛋白质电转实验的时候，凝胶上的Marker为什么不能转到硝酸纤维膜上啊。电转完成后，把凝胶拿去考马斯亮蓝染色，发现胶上也没点了。那这些点究竟转到哪里去了呢。

1.marker不是不能转过去，marker是能转过去的
并且marker是已经转过去了，等你的纤维素膜上经免疫组化显色后你就会看见marker带型的；
至于你说的为什么marker为什么没有转过去的问题是因为marker没有全部转过去，残留有一部分在胶上，这个没有什么影响的；

2.电转完成后胶上没有点是因为转膜充分或者有点过了导致蛋白全部跑出了胶，所以你做染色时候就发现没有明显的点

3.一般是建议摸索条件后达到电转完成后胶上有少许的残留以致可以通过蛋白胶的染色简单鉴定一下带型的
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
4楼2011-04-20 15:29:30
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xuguanghai

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

Xushufen0916(金币+2): 2011-04-21 09:14:50
引用回帖:
Originally posted by Xushufen0916 at 2011-04-20 15:11:45:
请教各位高手啊。我做蛋白质电转实验的时候，凝胶上的Marker为什么不能转到硝酸纤维膜上啊。电转完成后，把凝胶拿去考马斯亮蓝染色，发现胶上也没点了。那这些点究竟转到哪里去了呢。

你要是做western的话还是要用PVDF膜，不要用硝酸纤维膜。
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5楼2011-04-20 15:30:39
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roomofxw

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

Xushufen0916(金币+2): 2011-04-21 09:15:00
转的时间太长了，已经转过PVDF膜，透到滤纸上了吗？
为什么不试一试，预染色marker，可以直接观察的
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6楼2011-04-20 15:31:58
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