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wanwan1991

新虫 (初入文坛)

[求助] EMSA 尼龙膜转膜为什么看不到上端结合带已有1人参与

我的EMSA实验 使用SA碱性磷酸酶与BCIP NBT显色,每次都是下端未结合的biotin适配体条带能染色,但是和蛋白结合的biotin适配体一片空白!很捉急,有没有人解决过这个问题?我的蛋白和适配体肯定是结合了(也就说上端是应该有染色带的)这点我跑胶确认过了。谢谢! 另外我想问一下 ,我用的带正电的尼龙膜,转膜时是DNA和蛋白一起过来还是只有DNA能转?
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zwss

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


wanwan1991(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-07 18:26:29
最近也是刚开始做EMSA,个人觉得应该是DNA和蛋白都结合在膜上,楼主的情况,请问交联的是不是没问题,因为我有次忘了交联,发现与蛋白结合的条带显示的非常弱。
2楼2014-10-07 11:13:25
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wanwan1991

新虫 (初入文坛)

西门吹雪170: 屏蔽内容, 重复 2014-10-07 18:26:42
本帖内容被屏蔽

3楼2014-10-07 15:52:35
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wanwan1991

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zwss at 2014-10-07 11:13:25
最近也是刚开始做EMSA,个人觉得应该是DNA和蛋白都结合在膜上,楼主的情况,请问交联的是不是没问题,因为我有次忘了交联,发现与蛋白结合的条带显示的非常弱。

我的交联肯定是没有问题的 因为是标准紫外交联仪 设置1200 2min,而且显色出来下端的条带很明显。另外我想问问 你的
EMSA检出限大概是多少?
4楼2014-10-07 15:54:25
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zwss

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wanwan1991 at 2014-10-07 15:54:25
我的交联肯定是没有问题的 因为是标准紫外交联仪 设置1200 2min,而且显色出来下端的条带很明显。另外我想问问 你的
EMSA检出限大概是多少?...

额 ,我也是刚开始做,请问检出限是指什么?
5楼2014-10-08 16:30:54
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wanwan1991

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zwss at 2014-10-08 16:30:54
额 ,我也是刚开始做,请问检出限是指什么?...

就是能检出的最小浓度
6楼2014-10-14 09:03:15
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光辉2012岁月

新虫 (初入文坛)

请问楼主问题解决了吗?
7楼2019-06-29 19:18:12
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