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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » EMSA 尼龙膜转膜为什么看不到上端结合带
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wanwan1991

新虫 (初入文坛)

[求助] EMSA 尼龙膜转膜为什么看不到上端结合带 已有1人参与

我的EMSA实验 使用SA碱性磷酸酶与BCIP NBT显色，每次都是下端未结合的biotin适配体条带能染色，但是和蛋白结合的biotin适配体一片空白！很捉急，有没有人解决过这个问题？我的蛋白和适配体肯定是结合了（也就说上端是应该有染色带的）这点我跑胶确认过了。谢谢！ 另外我想问一下 ，我用的带正电的尼龙膜，转膜时是DNA和蛋白一起过来还是只有DNA能转？
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1楼 2014-09-29 11:42:57
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zwss

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
wanwan1991(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-07 18:26:29
最近也是刚开始做EMSA,个人觉得应该是DNA和蛋白都结合在膜上，楼主的情况，请问交联的是不是没问题，因为我有次忘了交联，发现与蛋白结合的条带显示的非常弱。
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2楼2014-10-07 11:13:25
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wanwan1991

新虫 (初入文坛)
西门吹雪170: 屏蔽内容, 重复 2014-10-07 18:26:42
本帖内容被屏蔽
3楼2014-10-07 15:52:35
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wanwan1991

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zwss at 2014-10-07 11:13:25
最近也是刚开始做EMSA,个人觉得应该是DNA和蛋白都结合在膜上，楼主的情况，请问交联的是不是没问题，因为我有次忘了交联，发现与蛋白结合的条带显示的非常弱。

我的交联肯定是没有问题的 因为是标准紫外交联仪 设置1200 2min，而且显色出来下端的条带很明显。另外我想问问 你的
EMSA检出限大概是多少？
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4楼2014-10-07 15:54:25
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zwss

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wanwan1991 at 2014-10-07 15:54:25
我的交联肯定是没有问题的 因为是标准紫外交联仪 设置1200 2min，而且显色出来下端的条带很明显。另外我想问问 你的
EMSA检出限大概是多少？...

额 ，我也是刚开始做，请问检出限是指什么？
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5楼2014-10-08 16:30:54
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wanwan1991

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zwss at 2014-10-08 16:30:54
额 ，我也是刚开始做，请问检出限是指什么？...

就是能检出的最小浓度
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6楼2014-10-14 09:03:15
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光辉2012岁月

新虫 (初入文坛)
请问楼主问题解决了吗？
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7楼2019-06-29 19:18:12
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