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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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ljapril

新虫 (初入文坛)

[求助] WB转膜后出现的问题

做WB,需要转一个快300KD的蛋白,转完膜后发现上面的泳道特别清楚,这是怎么回事呢?之前做过一些100一下的蛋白,转过的膜都是白色的,什么都看不到的,这次很奇怪,有谁晓得这是怎么回事吗

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Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


ljapril: 金币+1, 有帮助 2013-01-07 09:47:56
如果染色后出现清晰的泳道,那就说明western blot和转膜效果还不错,但是染色前这样那就说不通了。
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3楼2013-01-01 21:39:25
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Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这个结果的确看不出问题,可能得悲剧地再重做一次了,加样的量减少或稀释一下,祝你好运~
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6楼2013-01-01 22:12:02
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greenygreen

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ljapril: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-01-07 09:47:11
这是三明治有点短路,电流太大产生的效果。我也遇见过,不过似乎后续的结果还可以。Fermantas有一款300K的预染彩色marker,小贵。但是至少有的用。祝顺利~
10楼2013-01-02 10:32:18
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happypl

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
就是你的膜干了哈,建议用预染Marker,那个有指示作用
14楼2013-01-04 10:01:28
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普通回帖

Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
染色后还是染色前的图像?
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2楼2013-01-01 21:36:41
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ljapril

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Lester11 at 2013-01-01 21:39:25
如果染色后出现清晰的泳道,那就说明western blot和转膜效果还不错,但是染色前这样那就说不通了。

这是丽春红染后又洗掉的样子,但是膜刚拿出来是也和这个差不多哦
4楼2013-01-01 21:47:23
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Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


ljapril: 金币+1, 有帮助 2013-01-07 09:48:05
染过了话就可以啦,但是看不清条带,可能杂蛋白的量太多了吧,或者当初加样的量太多,跑出来分不清楚了
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5楼2013-01-01 22:10:01
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
ljapril: 金币+1, 有帮助 2013-01-07 09:48:16
如果染色前就是这个样子,感觉是你的膜干了。用的是湿法还是半干转移?是不是电压、电流有些高,或者转膜时间长了。
7楼2013-01-02 02:07:58
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ljapril

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-02 02:07:58
如果染色前就是这个样子,感觉是你的膜干了。用的是湿法还是半干转移?是不是电压、电流有些高,或者转膜时间长了。

湿转,两个半小时,250mA,因为蛋白分子量大,就多转了会,这样对结果有什么影响呢?
8楼2013-01-02 09:29:04
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ljapril

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Lester11 at 2013-01-01 22:10:01
染过了话就可以啦,但是看不清条带,可能杂蛋白的量太多了吧,或者当初加样的量太多,跑出来分不清楚了

加样总蛋白大概是40μg,一般做将近300的蛋白要跑多久的胶呢?没那么大的marker,都不知道蛋白进了分离胶没
9楼2013-01-02 09:31:57
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