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WB转膜后出现的问题
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WB转膜后出现的问题
做WB,需要转一个快300KD的蛋白,转完膜后发现上面的泳道特别清楚,这是怎么回事呢?之前做过一些100一下的蛋白,转过的膜都是白色的,什么都看不到的,这次很奇怪,有谁晓得这是怎么回事吗
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2013-01-01 21:29:28
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2013-01-07 09:47:56
如果染色后出现清晰的泳道,那就说明western blot和转膜效果还不错,但是染色前这样那就说不通了。
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2013-01-01 21:39:25
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这个结果的确看不出问题,可能得悲剧地再重做一次了,加样的量减少或稀释一下,祝你好运~
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2013-01-01 22:12:02
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2013-01-07 09:47:11
这是三明治有点短路,电流太大产生的效果。我也遇见过,不过似乎后续的结果还可以。Fermantas有一款300K的预染彩色marker,小贵。但是至少有的用。祝顺利~
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10楼
2013-01-02 10:32:18
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就是你的膜干了哈,建议用预染Marker,那个有指示作用
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2013-01-04 10:01:28
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染色后还是染色前的图像?
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2013-01-01 21:36:41
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Lester11
at 2013-01-01 21:39:25
如果染色后出现清晰的泳道,那就说明western blot和转膜效果还不错,但是染色前这样那就说不通了。
这是丽春红染后又洗掉的样子,但是膜刚拿出来是也和这个差不多哦
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2013-01-01 21:47:23
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2013-01-07 09:48:05
染过了话就可以啦,但是看不清条带,可能杂蛋白的量太多了吧,或者当初加样的量太多,跑出来分不清楚了
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2013-01-01 22:10:01
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2013-01-07 09:48:16
如果染色前就是这个样子,感觉是你的膜干了。用的是湿法还是半干转移?是不是电压、电流有些高,或者转膜时间长了。
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2013-01-02 02:07:58
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cicelyzh
at 2013-01-02 02:07:58
如果染色前就是这个样子,感觉是你的膜干了。用的是湿法还是半干转移?是不是电压、电流有些高,或者转膜时间长了。
湿转,两个半小时,250mA,因为蛋白分子量大,就多转了会,这样对结果有什么影响呢?
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8楼
2013-01-02 09:29:04
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Lester11
at 2013-01-01 22:10:01
染过了话就可以啦,但是看不清条带,可能杂蛋白的量太多了吧,或者当初加样的量太多,跑出来分不清楚了
加样总蛋白大概是40μg,一般做将近300的蛋白要跑多久的胶呢?没那么大的marker,都不知道蛋白进了分离胶没
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9楼
2013-01-02 09:31:57
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