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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » WB转膜后出现的问题
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ljapril

新虫 (初入文坛)

[求助] WB转膜后出现的问题

做WB，需要转一个快300KD的蛋白，转完膜后发现上面的泳道特别清楚，这是怎么回事呢？之前做过一些100一下的蛋白，转过的膜都是白色的，什么都看不到的，这次很奇怪，有谁晓得这是怎么回事吗

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1楼 2013-01-01 21:29:28
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
ljapril: 金币+1, ★有帮助 2013-01-07 09:47:56
如果染色后出现清晰的泳道，那就说明western blot和转膜效果还不错，但是染色前这样那就说不通了。
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3楼2013-01-01 21:39:25
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Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这个结果的确看不出问题，可能得悲剧地再重做一次了，加样的量减少或稀释一下，祝你好运~
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6楼2013-01-01 22:12:02
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greenygreen

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ljapril: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-01-07 09:47:11
这是三明治有点短路，电流太大产生的效果。我也遇见过，不过似乎后续的结果还可以。Fermantas有一款300K的预染彩色marker，小贵。但是至少有的用。祝顺利~
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10楼2013-01-02 10:32:18
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happypl

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
就是你的膜干了哈，建议用预染Marker，那个有指示作用
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14楼2013-01-04 10:01:28
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Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
染色后还是染色前的图像？
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2楼2013-01-01 21:36:41
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ljapril

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Lester11 at 2013-01-01 21:39:25
如果染色后出现清晰的泳道，那就说明western blot和转膜效果还不错，但是染色前这样那就说不通了。

这是丽春红染后又洗掉的样子，但是膜刚拿出来是也和这个差不多哦
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4楼2013-01-01 21:47:23
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Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
ljapril: 金币+1, ★有帮助 2013-01-07 09:48:05
染过了话就可以啦，但是看不清条带，可能杂蛋白的量太多了吧，或者当初加样的量太多，跑出来分不清楚了
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5楼2013-01-01 22:10:01
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
ljapril: 金币+1, ★有帮助 2013-01-07 09:48:16
如果染色前就是这个样子，感觉是你的膜干了。用的是湿法还是半干转移？是不是电压、电流有些高，或者转膜时间长了。
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7楼2013-01-02 02:07:58
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ljapril

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-02 02:07:58
如果染色前就是这个样子，感觉是你的膜干了。用的是湿法还是半干转移？是不是电压、电流有些高，或者转膜时间长了。

湿转，两个半小时，250mA，因为蛋白分子量大，就多转了会，这样对结果有什么影响呢？
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8楼2013-01-02 09:29:04
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ljapril

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Lester11 at 2013-01-01 22:10:01
染过了话就可以啦，但是看不清条带，可能杂蛋白的量太多了吧，或者当初加样的量太多，跑出来分不清楚了

加样总蛋白大概是40μg，一般做将近300的蛋白要跑多久的胶呢？没那么大的marker，都不知道蛋白进了分离胶没
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9楼2013-01-02 09:31:57
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