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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » WB转膜后出现的问题
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2013-01-04 11:35:28
ljapril: 金币+2, ★有帮助 2013-01-07 09:48:41
引用回帖:
8楼: Originally posted by ljapril at 2013-01-02 09:29:04
湿转，两个半小时，250mA，因为蛋白分子量大，就多转了会，这样对结果有什么影响呢？...

湿法不会是膜干掉了啊，半干有时候会的，膜刚拿出来就是这样吗？多转会没事的，我还转过3个小时的。一般不要让体系发热就行了，最好放到层析柜里或者cold room做。
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11楼2013-01-02 11:01:18
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ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2013-01-04 11:35:37
ljapril: 金币+2, ★有帮助 2013-01-07 09:48:53
不碍事
一般转完膜用PBST轻轻漂一下 如果蛋白总量多就能看到条带的
尤其做纯化的蛋白条带浓度梯度的时候 看的非常明显
都不用染色就看得到条带越来越粗
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12楼2013-01-03 03:28:39
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jimmy7633

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的PVDF膜在甲醇里浸过没，像是没浸过。
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13楼2013-01-03 19:35:07
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happypl

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
就是你的膜干了哈，建议用预染Marker，那个有指示作用
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14楼2013-01-04 10:01:28
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大的maker甲状腺球蛋白这个是60万的，不贵。 低电流长时间、转移即可。中间的花影很说明问题！
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shine
15楼2013-01-04 17:08:04
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ljapril

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by greenygreen at 2013-01-02 10:32:18
这是三明治有点短路，电流太大产生的效果。我也遇见过，不过似乎后续的结果还可以。Fermantas有一款300K的预染彩色marker，小贵。但是至少有的用。祝顺利~

哦，我就是没看到哪里有大的marker，谢谢哈
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16楼2013-01-07 09:43:51
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ljapril

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by jimmy7633 at 2013-01-03 19:35:07
你的PVDF膜在甲醇里浸过没，像是没浸过。

浸过了
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17楼2013-01-07 09:49:29
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oranzxc

金虫 (初入文坛)
如果western blot叫WB的话，那southern blot岂不是SB了
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18楼2013-01-07 10:28:13
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wdlnjau

银虫 (小有名气)
个人觉得你买的PVDF膜是有正反面的，你转到反面了
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我们的心憧憬着未来，有的时候，现实也许会令我们沮丧，但是这一切都是暂时的、转瞬即逝的，而那些逝去的，终将变得可爱和美好。
19楼2013-05-15 10:07:53
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