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ljapril

新虫 (初入文坛)

[求助] WB转膜后出现的问题

做WB,需要转一个快300KD的蛋白,转完膜后发现上面的泳道特别清楚,这是怎么回事呢?之前做过一些100一下的蛋白,转过的膜都是白色的,什么都看不到的,这次很奇怪,有谁晓得这是怎么回事吗

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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2013-01-04 11:35:28
ljapril: 金币+2, 有帮助 2013-01-07 09:48:41
引用回帖:
8楼: Originally posted by ljapril at 2013-01-02 09:29:04
湿转,两个半小时,250mA,因为蛋白分子量大,就多转了会,这样对结果有什么影响呢?...

湿法不会是膜干掉了啊,半干有时候会的,膜刚拿出来就是这样吗?多转会没事的,我还转过3个小时的。一般不要让体系发热就行了,最好放到层析柜里或者cold room做。
11楼2013-01-02 11:01:18
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Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
染色后还是染色前的图像?
Followyourheart!
2楼2013-01-01 21:36:41
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Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


ljapril: 金币+1, 有帮助 2013-01-07 09:47:56
如果染色后出现清晰的泳道,那就说明western blot和转膜效果还不错,但是染色前这样那就说不通了。
Followyourheart!
3楼2013-01-01 21:39:25
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ljapril

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Lester11 at 2013-01-01 21:39:25
如果染色后出现清晰的泳道,那就说明western blot和转膜效果还不错,但是染色前这样那就说不通了。

这是丽春红染后又洗掉的样子,但是膜刚拿出来是也和这个差不多哦
4楼2013-01-01 21:47:23
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