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western转膜后 膜上一片空白 marker也没转上，而且转膜液比较热是什么原因？
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最近做western一直不顺 希望高手给予帮忙啊 我的目的蛋白是116KDa， 分离胶8% 浓缩胶是5% 蛋白电泳恒压50V 50min 90V 60min 转膜时 恒压100V 90min 我看了下转膜当时电流在250mA左右跳动 应该算正常，以前还从没看到marker没转上的情况，这次转膜后膜上全是空白 用丽春红染了膜只看到泳道 但是没有条带。 转膜液也实施了降温措施 在冰上转膜 然后在转膜装置里也放了冷冻的冰块，但是转膜后转膜液很热，以前也没遇到过这种情况 |
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2楼2012-11-22 13:25:18
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6楼2012-11-23 04:23:10
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8楼2012-11-23 09:22:00
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哦您说的buffer是上样buffer吗？ 这个应该没错 每次都是一样的上样buffer。我们用的蛋白电泳液和转膜液Tris和甘氨酸比例是一样的 不知道你们的比例是怎样？ 这个比例是往届师兄师姐传下来的 我也有点怀疑这个比例会不会有问题，不过一直都在用 关于转膜液加什么水的问题，我试了下去离子水 好像加了甲醇之后没那么热 我们以前用的是mili-Q制的超纯水，但是我查了下超纯水是 水中的导电介质几乎完全去除的水，而去离子水是指去除呈离子形式杂质后的纯水，这两种水电阻率也不相同，不知道这两种水对电泳或转膜时正负极离子的移动有没有影响？ ps:我们换了去离子水后 蛋白电泳蛋白跑的特别齐 连成一条线 超纯水跑的时候没那么齐，都是各个孔单独跑 不是很齐。 |
9楼2012-11-23 09:39:06
10楼2012-11-23 09:44:01