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顽象

银虫 (小有名气)

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[求助] western转膜后膜上一片空白 marker也没转上，而且转膜液比较热是什么原因？

最近做western一直不顺希望高手给予帮忙啊
我的目的蛋白是116KDa，分离胶8% 浓缩胶是5% 蛋白电泳恒压50V 50min 90V 60min 转膜时恒压100V 90min 我看了下转膜当时电流在250mA左右跳动应该算正常，以前还从没看到marker没转上的情况，这次转膜后膜上全是空白用丽春红染了膜只看到泳道但是没有条带。转膜液也实施了降温措施在冰上转膜然后在转膜装置里也放了冷冻的冰块，但是转膜后转膜液很热，以前也没遇到过这种情况

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western blot 转膜后只看到marker条带，看不到样本，是怎么回事？已经有4人回复
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奋斗

1楼 2012-11-22 10:23:08

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顽象

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引用回帖:

3楼: Originally posted by seanzhu1996 at 2012-11-22 13:37:10
有没有检查一下蛋白样品？最好是跑两份平行的蛋白样品，跑完蛋白电泳后拿一份染色看看，保证样品无误后再转膜。

蛋白样品应该没问题，前一次做的染胶条带挺清楚的  现在就在纠结配蛋白电泳液和转膜液是用超纯水还是去离子水的问题。。。。  我们的配方是蛋白电泳液 t
ris:3.03g
甘氨酸:18.8g
SDS:1g 蒸馏水定溶至1 L

转膜液：Tris          3.03 g
甘氨酸    18.8 g
甲醇       200 mL 蒸馏水定溶至1 L
这个定溶的时候加的蒸馏水因为配转膜液的时候容易发热所以我们想换成去离子水不知是否可行？