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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western转膜后 膜上一片空白 marker也没转上，而且转膜液比较热是什么原因？
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-11-24 08:47:03
我们都是在冰浴条件下转膜的~发热跟你用蒸馏水以及去离子水无关，至少我们都是蒸馏水配转膜液的~
转膜的时候也可以用预染的蛋白marker，这样就有个对照了~
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11楼2012-11-23 10:15:54
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顽象

银虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-11-23 10:15:54
我们都是在冰浴条件下转膜的~发热跟你用蒸馏水以及去离子水无关，至少我们都是蒸馏水配转膜液的~
转膜的时候也可以用预染的蛋白marker，这样就有个对照了~

我们有用marker  以前marker都能转上 只是转的有点时清楚有时不清楚  但是这次marker转膜后 膜上一片空白 maker也没有 是转过头了  还是怎么搞的
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奋斗
12楼2012-11-23 10:56:12
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 顽象 at 2012-11-23 09:44:01
哦这两个好像都没有也  一直都是放在冰上转膜  昨天用了恒压100V转的电流达到300mA左右  这跟用的冰块多少有没有很大的关系？   100v恒压电流大概多少呢？   或者恒流200mA和300mA的电流 电压标准分别是多少呢？...

电压电流的比例关系我想并不完全一样，谈不上什么标准。因为transfer buffer，转移体系并不完全相同。我做湿法转移的时候一般是用70V, 电流大小并不全相同，一般在350-400mA左右。
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13楼2012-11-23 11:36:51
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 顽象 at 2012-11-23 10:56:12
我们有用marker  以前marker都能转上 只是转的有点时清楚有时不清楚  但是这次marker转膜后 膜上一片空白 maker也没有 是转过头了  还是怎么搞的...

转过头？不至于吧……这个样子更像是没转上。当然如果楼主你担心转过头的话，可以转到中途卸下来看一下在不在上面~
还有别是电极装反了啊，那肯定转不上了……
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14楼2012-11-23 12:44:10
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henryxue

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 顽象 at 2012-11-23 09:39:06
哦您说的buffer是上样buffer吗？ 这个应该没错  每次都是一样的上样buffer。我们用的蛋白电泳液和转膜液Tris和甘氨酸比例是一样的   不知道你们的比例是怎样？   这个比例是往届师兄师姐传下来的    我也有点怀疑这 ...

我说的buffer就是指的running或者transfer buffer，呵呵
你的配方我也在网上看到过，不过我们常用另一个配方，不知道是不是会有所改善
48mM Tris  39mM Glycine  20% methanol
我们都是用去离子水，从来没用过milli-Q水，一直都没啥影响
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15楼2012-11-23 12:46:28
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yyll1988

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-11-24 08:46:48
我们都是坐在冰浴里面转的，转膜缓冲液要经常换的。至于为什么我也不知道。只是上面传下来的要求。是不是电机插反了啊？
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16楼2012-11-23 19:16:13
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宁夏8083

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-11-24 08:46:19
估计是你的转膜没有转上，一般做WB时，分离胶多用恒压，大概浓缩时80V 分离为了赶时间我们常用100-120V；但是转膜时通常用横流 300mA 两小时左右，通常湿转在冰浴中进行，没有问题的。转膜液比例可能有问题。另外，加了甲醇是会发热，但是你有冰浴啊，不会有问题的。最后还有一种可能，是不是转过了，蛋白透膜出去了？
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17楼2012-11-23 20:28:25
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张力民

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2012-11-24 08:46:26
水的问题不大，用蒸馏水即可。我觉得你转的电压太高了，我以前都是恒流100mA转的，120min。一般没问题。
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18楼2012-11-23 22:53:13
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顽象

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by henryxue at 2012-11-23 08:04:18
你说丽春红能看到泳道，估计是转上了，可能是因为太热了所以转糊了？你说里面加了冰，确定一下buffer没有用错。我看你转膜液的Tris和Glycine的比例和电泳液的是一样的，你再确定一下。
转膜液因为甲醇加水容易发热 ...

但是我试了两次了 用去离子水配转膜液 加甲醇后不发热的   这难道是去离子水与纯水之间的区别吗？
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奋斗
19楼2012-11-27 20:55:47
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henryxue

木虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 顽象 at 2012-11-27 20:55:47
但是我试了两次了 用去离子水配转膜液 加甲醇后不发热的   这难道是去离子水与纯水之间的区别吗？...

也许吧，没用过纯水配转膜液的经验
网上查的：
当水分子之间的氢键被撕裂破坏时，放热现象如：甲醇荣誉水、硫酸荣誉水等；当水分子之间的氢键重新建立时，吸热现象如：水溶解绿化那，乙氰溶解与水中。

这样的话大概能解释一下两种水放热不同的原因吧
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20楼2012-11-27 21:42:07
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