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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western转膜后 膜上一片空白 marker也没转上，而且转膜液比较热是什么原因？
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顽象

银虫 (小有名气)

[求助] western转膜后 膜上一片空白 marker也没转上，而且转膜液比较热是什么原因？

最近做western一直不顺  希望高手给予帮忙啊
我的目的蛋白是116KDa，  分离胶8%   浓缩胶是5%  蛋白电泳恒压50V 50min  90V 60min   转膜时 恒压100V  90min  我看了下转膜当时电流在250mA左右跳动 应该算正常，以前还从没看到marker没转上的情况，这次转膜后膜上全是空白 用丽春红染了膜只看到泳道 但是没有条带。  转膜液也实施了降温措施 在冰上转膜 然后在转膜装置里也放了冷冻的冰块，但是转膜后转膜液很热，以前也没遇到过这种情况
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奋斗
1楼 2012-11-22 10:23:08
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顽象

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-23 04:23:10
我们有个cold room，如果有层析冰箱也可以。...

哦这两个好像都没有也  一直都是放在冰上转膜  昨天用了恒压100V转的电流达到300mA左右  这跟用的冰块多少有没有很大的关系？   100v恒压电流大概多少呢？   或者恒流200mA和300mA的电流 电压标准分别是多少呢？
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奋斗
10楼2012-11-23 09:44:01
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
湿法转移可能会有一点发热，试试放到4度下转。
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2楼2012-11-22 13:25:18
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seanzhu1996

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+2, 鼓励 常来 2012-11-22 15:53:48
有没有检查一下蛋白样品？最好是跑两份平行的蛋白样品，跑完蛋白电泳后拿一份染色看看，保证样品无误后再转膜。
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享受每天的生活
3楼2012-11-22 13:37:10
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顽象

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by seanzhu1996 at 2012-11-22 13:37:10
有没有检查一下蛋白样品？最好是跑两份平行的蛋白样品，跑完蛋白电泳后拿一份染色看看，保证样品无误后再转膜。

蛋白样品应该没问题，前一次做的染胶条带挺清楚的  现在就在纠结配蛋白电泳液和转膜液是用超纯水还是去离子水的问题。。。。  我们的配方是 蛋白电泳液 t
ris:3.03g   
甘氨酸:18.8g   
SDS:1g 蒸馏水定溶至1 L
   
转膜液：Tris           3.03 g
甘氨酸       18.8 g
甲醇          200 mL 蒸馏水定溶至1 L
这个定溶的时候加的蒸馏水因为配转膜液的时候容易发热   所以我们想换成去离子水 不知是否可行？
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奋斗
4楼2012-11-22 21:08:48
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