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ssssss128

木虫 (正式写手)

[求助] PAGE后转膜为什么转着转着连Maker都没了呢 已有3人参与

PAGE后转膜为什么转着转着连Maker都没了呢?????

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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ssssss128: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-04-18 22:28:19
膜上是否有目的蛋白存在?只是MARK没了,还是白版一块?信息太少,只能提几个建议:
1.确定装置是否有问题
2.转膜时间是否有问题,正常的Marker,转1~2h就差不多了
3.转膜以前平衡的是否充分
4.转印槽冰浴的效果过怎么样
与WB有关的问题可以到这个上面看看:WesternBlot常见问题FAQ

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
2楼2015-04-17 10:15:16
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ssssss128

木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-04-17 10:15:16
膜上是否有目的蛋白存在?只是MARK没了,还是白版一块?信息太少,只能提几个建议:
1.确定装置是否有问题
2.转膜时间是否有问题,正常的Marker,转1~2h就差不多了
3.转膜以前平衡的是否充分
4.转印槽冰浴的效果 ...

谢谢您!maker和样都没出来,可能是转的时候没弄好,弄到膜上膜还弄破了一点,后面的步骤不是很熟悉,还在摸索

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3楼2015-04-17 11:19:03
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魅冉findy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是放反了,或者是你夹的时候移动位置过大,或者是分子量小的蛋白转的时间太久,转出去了,再不就是转的时候膜用了不合适的规格。最可能就是黑色电极对黑色面

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

细语低声如梦,清浅带绵。
4楼2015-04-18 20:28:06
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694839002

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是装置放反和时间2个问题,分别再尝试下

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

PTMproteomicsisthefutureoflifescicence http://www.ptm-biolab.com.cn/
5楼2015-04-18 21:46:41
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ssssss128

木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 魅冉findy at 2015-04-18 20:28:06
应该是放反了,或者是你夹的时候移动位置过大,或者是分子量小的蛋白转的时间太久,转出去了,再不就是转的时候膜用了不合适的规格。最可能就是黑色电极对黑色面
...

电极放对了,可能是膜的问题,请问您用的是什么膜呢?分子量是65k的,第二次做在滤纸上看到了marker

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6楼2015-04-18 22:25:55
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ssssss128

木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 694839002 at 2015-04-18 21:46:41
应该是装置放反和时间2个问题,分别再尝试下

请问分子量是65k的用多大电流呢?还是用电压?我们采用的是200mA.1小时,你用的膜是哪个牌子的呢?

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2015-04-18 22:27:40
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694839002

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by ssssss128 at 2015-04-18 22:27:40
请问分子量是65k的用多大电流呢?还是用电压?我们采用的是200mA.1小时,你用的膜是哪个牌子的呢?
...

65kDa不算大,现在应该确定下是没转上 还是转过头了。我们用bio rad的半干转,1-1.5h,差不多,湿转时间长一点;用膜NC和PVDF都可以。还有三明治是否对准了。一般转膜不是wb里容易出问题的地方
PTMproteomicsisthefutureoflifescicence http://www.ptm-biolab.com.cn/
8楼2015-04-19 14:03:43
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