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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » Western Bio-rad湿转转膜 2张一起转时 总有一张会花掉 请问是什么情况
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铜车马纪念卡

新虫 (初入文坛)

[求助] Western Bio-rad湿转转膜 2张一起转时 总有一张会花掉 请问是什么情况 已有2人参与

300mA 2~2.5h 蛋白是30-100k

以前一直是好的 这几次连续总有一张会花掉，marker花掉，孵育抗体后显影对应的蛋白也会花掉

但是另一张就完全是好的 只会花掉一张 完全不知道原因是什么！

请问有没有谁知道为什么 是哪一步的问题……谢谢……！
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1楼 2014-04-08 18:32:53
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2014-04-09 11:07:46
下次再转的时候在两边板子上分别做上标记，其他保持一致。看看是不是固定的一边一直花掉，如果是的话可能是那边的电压的问题。
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2楼2014-04-09 08:55:02
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铜车马纪念卡

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-09 08:55:02
下次再转的时候在两边板子上分别做上标记，其他保持一致。看看是不是固定的一边一直花掉，如果是的话可能是那边的电压的问题。

谢谢你的回复！

我一共连续做了6次

前3次固定是外面的那侧花掉 第4次两张都没花 第5-6次是里面这张花掉 我觉得特别奇怪……

师姐也是转2张 没有花 我中间做的那次也没有花 但是另外5次老是会花掉一边

而不花的那一边结果是很好的 不知道为啥……

我也一度怀疑是转膜的槽坏了 但测了测电阻 看来是好的

我觉得肯定哪里有问题但是又说不上来 因为有一张是完好的说明操作没问题啊……
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3楼2014-04-09 11:33:13
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
铜车马纪念卡: 金币+4, ★★★★★最佳答案, 谢谢你！真的是这个原因。我用热水冲洗干净了铂金丝，就好了。太高兴了！ 2014-04-11 13:46:40
看看是不是阴极铂金丝结晶了
夹子夹紧点。
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4楼2014-04-09 12:12:31
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
铜车马纪念卡(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-09 14:14:36
转膜液不要加太多，可能在电极金属柱那里短路使转膜的电场不均匀。
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5楼2014-04-09 12:15:41
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铜车马纪念卡

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-04-09 12:12:31
看看是不是阴极铂金丝结晶了
夹子夹紧点。

夹子夹得还是比较紧

我去看了 真的有类似结晶的东西 洗洗看看后天能不能转好

而且我转膜液真的加得有点多 因为配了1L 就都倒进去 超过了盒子上标的线 但是肯定没有接触到金属电极 我后天还是加少点试试看

谢谢你！希望后天能成功
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6楼2014-04-09 13:58:07
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铜车马纪念卡

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-04-09 12:12:31
看看是不是阴极铂金丝结晶了
夹子夹紧点。

有两、三处都有盐析出，有个地方盐析在了那个细的塑料管包裹铂金丝的口口上，请问可以用什么溶剂把盐溶了而不损坏铂金和塑料呢？

或者超声行不？我怕超烂了……谢谢！
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7楼2014-04-09 14:19:11
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 铜车马纪念卡 at 2014-04-09 14:19:11
有两、三处都有盐析出，有个地方盐析在了那个细的塑料管包裹铂金丝的口口上，请问可以用什么溶剂把盐溶了而不损坏铂金和塑料呢？

或者超声行不？我怕超烂了……谢谢！...

镊子轻轻刮一下，别把铂金丝弄断
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8楼2014-04-09 15:53:08
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fengdouzh

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
9楼2018-04-03 20:05:28
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