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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 200bp DNA PCR
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王叶kaoyan

金虫 (初入文坛)

叶子

[求助] 200bp DNA PCR 已有2人参与

最近200bp DNA PCR一直都是这样，以前挺好的，突然就一直是弥散了，不知道哪里出差了。请各位老师指点一下。感谢老师们帮忙呀！

200bp DNA PCR
clip_image002.jpg
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伟大是熬出来的！
1楼 2015-04-14 21:04:07
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shenma521

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议重新合成引物再pcr方能解决你的问题，每次pcr要加上阳性和阴性对照！

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

王叶kaoyan
2楼2015-04-14 21:40:16
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王叶kaoyan

金虫 (初入文坛)

叶子
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by shenma521 at 2015-04-14 21:40:16
建议重新合成引物再pcr方能解决你的问题，每次pcr要加上阳性和阴性对照！

为什么你觉得是引物的问题呢？还有我们做的时候一直是以marker做对照的，你说的阳性和阴性对照是什么意思？我是初学者，请教请教
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伟大是熬出来的！
3楼2015-04-14 21:51:34
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shenma521

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-04-15 22:08:41
引用回帖:
3楼: Originally posted by 王叶kaoyan at 2015-04-14 21:51:34
为什么你觉得是引物的问题呢？还有我们做的时候一直是以marker做对照的，你说的阳性和阴性对照是什么意思？我是初学者，请教请教...

阳性对照指的是在pcr体系中肯定能p出条带，用来验证引物以及整个体系有无问题！
阴性对照一般是整个体系中不加模板，用水补齐，这样正常情况下是p不出条带的！
如果你有很大的把握认为引物没问题，我建议你用takara LA Taq酶进行pcr。
提高下你的退火温度，模板要加适量。

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4楼2015-04-14 23:13:25
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shenma521

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 王叶kaoyan at 2015-04-14 21:51:34
为什么你觉得是引物的问题呢？还有我们做的时候一直是以marker做对照的，你说的阳性和阴性对照是什么意思？我是初学者，请教请教...

从你的电泳图上看，你配制的胶浓度小于等于1%,marker条带跑的也不好，电压大了不过还是你的胶没有煮完全溶解。

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5楼2015-04-14 23:18:41
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王叶kaoyan

金虫 (初入文坛)

叶子
引用回帖:
4楼: Originally posted by shenma521 at 2015-04-14 23:13:25
阳性对照指的是在pcr体系中肯定能p出条带，用来验证引物以及整个体系有无问题！
阴性对照一般是整个体系中不加模板，用水补齐，这样正常情况下是p不出条带的！
如果你有很大的把握认为引物没问题，我建议你用tak ...

我们模板都是加1ul的
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伟大是熬出来的！
6楼2015-04-15 09:33:22
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王叶kaoyan

金虫 (初入文坛)

叶子
引用回帖:
4楼: Originally posted by shenma521 at 2015-04-14 23:13:25
阳性对照指的是在pcr体系中肯定能p出条带，用来验证引物以及整个体系有无问题！
阴性对照一般是整个体系中不加模板，用水补齐，这样正常情况下是p不出条带的！
如果你有很大的把握认为引物没问题，我建议你用tak ...

我用的就是这种酶，我现在的退火温度是56℃
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伟大是熬出来的！
7楼2015-04-15 14:15:48
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王叶kaoyan

金虫 (初入文坛)

叶子
引用回帖:
5楼: Originally posted by shenma521 at 2015-04-14 23:18:41
从你的电泳图上看，你配制的胶浓度小于等于1%,marker条带跑的也不好，电压大了不过还是你的胶没有煮完全溶解。
...

我的胶是用微波炉煮的，应该完全溶解了
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伟大是熬出来的！
8楼2015-04-15 14:16:43
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王叶kaoyan

金虫 (初入文坛)

叶子
引用回帖:
5楼: Originally posted by shenma521 at 2015-04-14 23:18:41
从你的电泳图上看，你配制的胶浓度小于等于1%,marker条带跑的也不好，电压大了不过还是你的胶没有煮完全溶解。
...

我的胶是用微波炉煮的，应该完全溶解了
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伟大是熬出来的！
9楼2015-04-15 14:17:19
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by shenma521 at 2015-04-14 23:13:25
阳性对照指的是在pcr体系中肯定能p出条带，用来验证引物以及整个体系有无问题！
阴性对照一般是整个体系中不加模板，用水补齐，这样正常情况下是p不出条带的！
如果你有很大的把握认为引物没问题，我建议你用tak ...

takara LA Taq酶？.....,她才200bp而已
一般的酶就行了，最多也就用个热启动酶，哪用得着LA Taq 聚合酶
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
10楼2015-04-15 16:42:10
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