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王叶kaoyan

金虫 (初入文坛)

叶子

[求助] 200bp DNA PCR 已有2人参与

最近200bp DNA PCR一直都是这样,以前挺好的,突然就一直是弥散了,不知道哪里出差了。请各位老师指点一下。感谢老师们帮忙呀!

200bp DNA PCR
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伟大是熬出来的!
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shenma521

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议重新合成引物再pcr方能解决你的问题,每次pcr要加上阳性和阴性对照!

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2015-04-14 21:40:16
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王叶kaoyan

金虫 (初入文坛)

叶子

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by shenma521 at 2015-04-14 21:40:16
建议重新合成引物再pcr方能解决你的问题,每次pcr要加上阳性和阴性对照!

为什么你觉得是引物的问题呢?还有我们做的时候一直是以marker做对照的,你说的阳性和阴性对照是什么意思?我是初学者,请教请教
伟大是熬出来的!
3楼2015-04-14 21:51:34
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shenma521

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-04-15 22:08:41
引用回帖:
3楼: Originally posted by 王叶kaoyan at 2015-04-14 21:51:34
为什么你觉得是引物的问题呢?还有我们做的时候一直是以marker做对照的,你说的阳性和阴性对照是什么意思?我是初学者,请教请教...

阳性对照指的是在pcr体系中肯定能p出条带,用来验证引物以及整个体系有无问题!
阴性对照一般是整个体系中不加模板,用水补齐,这样正常情况下是p不出条带的!
如果你有很大的把握认为引物没问题,我建议你用takara LA Taq酶进行pcr。
提高下你的退火温度,模板要加适量。

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-04-14 23:13:25
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shenma521

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 王叶kaoyan at 2015-04-14 21:51:34
为什么你觉得是引物的问题呢?还有我们做的时候一直是以marker做对照的,你说的阳性和阴性对照是什么意思?我是初学者,请教请教...

从你的电泳图上看,你配制的胶浓度小于等于1%,marker条带跑的也不好,电压大了不过还是你的胶没有煮完全溶解。

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2015-04-14 23:18:41
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王叶kaoyan

金虫 (初入文坛)

叶子

引用回帖:
4楼: Originally posted by shenma521 at 2015-04-14 23:13:25
阳性对照指的是在pcr体系中肯定能p出条带,用来验证引物以及整个体系有无问题!
阴性对照一般是整个体系中不加模板,用水补齐,这样正常情况下是p不出条带的!
如果你有很大的把握认为引物没问题,我建议你用tak ...

我们模板都是加1ul的
伟大是熬出来的!
6楼2015-04-15 09:33:22
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王叶kaoyan

金虫 (初入文坛)

叶子

引用回帖:
4楼: Originally posted by shenma521 at 2015-04-14 23:13:25
阳性对照指的是在pcr体系中肯定能p出条带,用来验证引物以及整个体系有无问题!
阴性对照一般是整个体系中不加模板,用水补齐,这样正常情况下是p不出条带的!
如果你有很大的把握认为引物没问题,我建议你用tak ...

我用的就是这种酶,我现在的退火温度是56℃
伟大是熬出来的!
7楼2015-04-15 14:15:48
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王叶kaoyan

金虫 (初入文坛)

叶子

引用回帖:
5楼: Originally posted by shenma521 at 2015-04-14 23:18:41
从你的电泳图上看,你配制的胶浓度小于等于1%,marker条带跑的也不好,电压大了不过还是你的胶没有煮完全溶解。
...

我的胶是用微波炉煮的,应该完全溶解了
伟大是熬出来的!
8楼2015-04-15 14:16:43
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王叶kaoyan

金虫 (初入文坛)

叶子

引用回帖:
5楼: Originally posted by shenma521 at 2015-04-14 23:18:41
从你的电泳图上看,你配制的胶浓度小于等于1%,marker条带跑的也不好,电压大了不过还是你的胶没有煮完全溶解。
...

我的胶是用微波炉煮的,应该完全溶解了
伟大是熬出来的!
9楼2015-04-15 14:17:19
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by shenma521 at 2015-04-14 23:13:25
阳性对照指的是在pcr体系中肯定能p出条带,用来验证引物以及整个体系有无问题!
阴性对照一般是整个体系中不加模板,用水补齐,这样正常情况下是p不出条带的!
如果你有很大的把握认为引物没问题,我建议你用tak ...

takara LA Taq酶?.....,她才200bp而已
一般的酶就行了,最多也就用个热启动酶,哪用得着LA Taq 聚合酶
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
10楼2015-04-15 16:42:10
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