应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » fusion pcr 3000bp and m2400bp
131/2返回列表12下一页
查看: 1302  |  回复: 12
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

�?進興

新虫 (初入文坛)

[求助] fusion pcr 3000bp and m2400bp

請各位幫忙
本人想要把3000bp與2400bp的片段以fusin pcr的方式連接起?砥渲丿B區域有45 base
做好幾次都做不出?頊囟�?�70到50度都試過還是試不出?�,想請大家幫忙謝謝
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2012-04-27 14:51:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-28 08:22:09
引物设计有没有问题？重叠区域是反向互补的吗？两条引物的Tm值都是多少啊？相差不要超过3度。退火温度比tm值低5-15度
赞一下 回复此楼
未来不是梦
2楼2012-04-27 14:59:16
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

�?進興

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-04-27 14:59:16:
引物设计有没有问题？重叠区域是反向互补的吗？两条引物的Tm值都是多少啊？相差不要超过3度。退火温度比tm值低5-15度

引物因該沒問題,重叠区域是反向互补,tm值是重叠区域的溫度嗎?
赞一下 回复此楼
3楼2012-04-27 15:05:18
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

�?進興

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-04-27 14:59:16:
引物设计有没有问题？重叠区域是反向互补的吗？两条引物的Tm值都是多少啊？相差不要超过3度。退火温度比tm值低5-15度

請問是否多大的片段互補區域就多長 請問如何算互補區域
赞一下 回复此楼
4楼2012-04-27 15:09:06
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

那到不用，我们实验室做的反向互补区域一般都是15-20bp，互补区一般是18-25bp。
赞一下 回复此楼
未来不是梦
5楼2012-04-27 15:34:20
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

�?進興

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-04-27 15:34:20:
那到不用，我们实验室做的反向互补区域一般都是15-20bp，互补区一般是18-25bp。

第一片段 正向primer ccctg taata tcacg catcg
              反向primer atggt tcata tgcga ctgga
第二片段 正向primer agagc aaaca tgtat ccagt cg
              反向primer tccag tcgca tatga accat gtcat agagg gaacg ccaga
第一片段約3000bp,第二片段約2400bp 想使用fusion pcr 使這兩個片段融合在一起 ,taq是使用E-bio fusion DNA Polymerase後面沒有加A ,3`到5`有很好的校正性
denaturation 98度
annealing     60度
extension    68度

目前做了一年還沒出?� 拜託大家解救我
赞一下 回复此楼
6楼2012-04-27 16:04:05
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你的引物设计错了   第四条不对  其实很好做的  自己再仔细画图   看看自己要怎么连接  按照你的引物连接不上  方向有问题  是5-3的方向
赞一下 回复此楼
未来不是梦
7楼2012-04-27 16:21:21
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

�?進興

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-04-27 16:21:21:
你的引物设计错了   第四条不对  其实很好做的  自己再仔细画图   看看自己要怎么连接  按照你的引物连接不上  方向有问题  是5-3的方向

第一片段 正向primer ccctg taata tcacg catcg
               反向primer atggt tcata tgcga ctgga
第二片段 正向primer agagc aaaca tgtat ccagt cg
               反向primer tccag tcgca tatga accat gtcat agagg gaacg ccaga
第一片段約3000bp,第二片段約2400bp 想使用fusion pcr 使這兩個片段融合在一起 因為要在各個基因塞啟動子我們會把第二端的基因倒過?碜尩诙畏聪蚺c第一片段反向引物做互補,taq是使用E-bio fusion DNA Polymerase後面沒有加A ,3`到5`有很好的校正性
denaturation 98度
annealing     60度
extension    68度
目前做了一年還沒出?� 拜託大家解救我
赞一下 回复此楼
8楼2012-04-27 16:53:16
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

�?進興

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-04-27 16:21:21:
你的引物设计错了   第四条不对  其实很好做的  自己再仔细画图   看看自己要怎么连接  按照你的引物连接不上  方向有问题  是5-3的方向

第一片段 正向primer ccctg taata tcacg catcg
               反向primer atggt tcata tgcga ctgga
第二片段 正向primer agagc aaaca tgtat ccagt cg
               反向primer tccag tcgca tatga accat gtcat agagg gaacg ccaga
第一片段約3000bp,第二片段約2400bp 想使用fusion pcr 使這兩個片段融合在一起 因為要在各個基因塞啟動子我們會把第二端的基因倒過?碜尩诙畏聪蚺c第一片段反向引物做互補,taq是使用E-bio fusion DNA Polymerase後面沒有加A ,3`到5`有很好的校正性
denaturation 98度
annealing     60度
extension    68度
目前做了一年還沒出?� 拜託大家解救我
赞一下 回复此楼
9楼2012-04-27 16:53:37
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

�?進興

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-04-27 16:21:21:
你的引物设计错了   第四条不对  其实很好做的  自己再仔细画图   看看自己要怎么连接  按照你的引物连接不上  方向有问题  是5-3的方向

第一片段 正向primer ccctg taata tcacg catcg
               反向primer atggt tcata tgcga ctgga
第二片段 正向primer agagc aaaca tgtat ccagt cg
               反向primer tccag tcgca tatga accat gtcat agagg gaacg ccaga
第一片段約3000bp,第二片段約2400bp 想使用fusion pcr 使這兩個片段融合在一起 因為要在各個基因塞啟動子我們會把第二端的基因倒過?碜尩诙畏聪蚺c第一片段反向引物做互補,taq是使用E-bio fusion DNA Polymerase後面沒有加A ,3`到5`有很好的校正性
denaturation 98度
annealing     60度
extension    68度
目前做了一年還沒出?� 拜託大家解救我
赞一下 回复此楼
10楼2012-04-27 16:54:02
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 �?進興 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭