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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » fusion pcr 3000bp and m2400bp
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�?進興

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-04-27 16:21:21:
你的引物设计错了   第四条不对  其实很好做的  自己再仔细画图   看看自己要怎么连接  按照你的引物连接不上  方向有问题  是5-3的方向

第一片段 正向primer ccctg taata tcacg catcg
               反向primer atggt tcata tgcga ctgga
第二片段 正向primer agagc aaaca tgtat ccagt cg
               反向primer tccag tcgca tatga accat gtcat agagg gaacg ccaga
第一片段約3000bp,第二片段約2400bp 想使用fusion pcr 使這兩個片段融合在一起 因為要在各個基因塞啟動子我們會把第二端的基因倒過?碜尩诙畏聪蚺c第一片段反向引物做互補,taq是使用E-bio fusion DNA Polymerase後面沒有加A ,3`到5`有很好的校正性
denaturation 98度
annealing     60度
extension    68度
目前做了一年還沒出?� 拜託大家解救我
赞一下 回复此楼
11楼2012-04-27 16:58:32
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�?進興

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-04-27 16:21:21:
你的引物设计错了   第四条不对  其实很好做的  自己再仔细画图   看看自己要怎么连接  按照你的引物连接不上  方向有问题  是5-3的方向

第一片段 正向primer ccctg taata tcacg catcg
               反向primer atggt tcata tgcga ctgga
第二片段 正向primer agagc aaaca tgtat ccagt cg
               反向primer tccag tcgca tatga accat gtcat agagg gaacg ccaga
第一片段約3000bp,第二片段約2400bp 想使用fusion pcr 使這兩個片段融合在一起 因為要在各個基因塞啟動子我們會把第二端的基因倒過?碜尩诙畏聪蚺c第一片段反向引物做互補,taq是使用E-bio fusion DNA Polymerase後面沒有加A ,3`到5`有很好的校正性
denaturation 98度
annealing     60度
extension    68度
目前做了一年還沒出?� 拜託大家解救我
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12楼2012-04-27 16:59:24
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tyw2623

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应应助 2012-04-28 11:34:05
觉得你可以试试：
95℃    4min
95℃    1min
55℃    1min
72℃   -----------这个得看什么酶，和基因有多大
72℃    4min
原来也是扩不出来，后来换了这个体系就解决了，当然lz可以继续优化体系，祝顺利
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水遁
13楼2012-04-28 10:49:12
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