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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » fusion pcr 3000bp and m2400bp
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�?進興

新虫 (初入文坛)

[求助] fusion pcr 3000bp and m2400bp

請各位幫忙
本人想要把3000bp與2400bp的片段以fusin pcr的方式連接起?砥渲丿B區域有45 base
做好幾次都做不出?頊囟�?�70到50度都試過還是試不出?�,想請大家幫忙謝謝
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1楼2012-04-27 14:51:09
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�?進興

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-04-27 14:59:16:
引物设计有没有问题？重叠区域是反向互补的吗？两条引物的Tm值都是多少啊？相差不要超过3度。退火温度比tm值低5-15度

請問是否多大的片段互補區域就多長 請問如何算互補區域
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4楼2012-04-27 15:09:06
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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-28 08:22:09
引物设计有没有问题？重叠区域是反向互补的吗？两条引物的Tm值都是多少啊？相差不要超过3度。退火温度比tm值低5-15度
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未来不是梦
2楼2012-04-27 14:59:16
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�?進興

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-04-27 14:59:16:
引物设计有没有问题？重叠区域是反向互补的吗？两条引物的Tm值都是多少啊？相差不要超过3度。退火温度比tm值低5-15度

引物因該沒問題,重叠区域是反向互补,tm值是重叠区域的溫度嗎?
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3楼2012-04-27 15:05:18
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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

那到不用，我们实验室做的反向互补区域一般都是15-20bp，互补区一般是18-25bp。
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未来不是梦
5楼2012-04-27 15:34:20
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