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�?進興

新虫 (初入文坛)

[求助] fusion pcr 3000bp and m2400bp

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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-28 08:22:09
引物设计有没有问题?重叠区域是反向互补的吗?两条引物的Tm值都是多少啊?相差不要超过3度。退火温度比tm值低5-15度
未来不是梦
2楼2012-04-27 14:59:16
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�?進興

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-04-27 14:59:16:
引物设计有没有问题?重叠区域是反向互补的吗?两条引物的Tm值都是多少啊?相差不要超过3度。退火温度比tm值低5-15度

引物因該沒問題,重叠区域是反向互补,tm值是重叠区域的溫度嗎?
3楼2012-04-27 15:05:18
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�?進興

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-04-27 14:59:16:
引物设计有没有问题?重叠区域是反向互补的吗?两条引物的Tm值都是多少啊?相差不要超过3度。退火温度比tm值低5-15度

請問是否多大的片段互補區域就多長 請問如何算互補區域
4楼2012-04-27 15:09:06
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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

那到不用,我们实验室做的反向互补区域一般都是15-20bp,互补区一般是18-25bp。
未来不是梦
5楼2012-04-27 15:34:20
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�?進興

新虫 (初入文坛)

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5?: Originally posted by ?????123 at 2012-04-27 15:34:20:
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?????? ????primer ccctg taata tcacg catcg
              ????primer atggt tcata tgcga ctgga
?????? ????primer agagc aaaca tgtat ccagt cg
              ????primer tccag tcgca tatga accat gtcat agagg gaacg ccaga
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denaturation 98??
annealing     60??
extension    68??

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6楼2012-04-27 16:04:05
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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你的引物设计错了   第四条不对  其实很好做的  自己再仔细画图   看看自己要怎么连接  按照你的引物连接不上  方向有问题  是5-3的方向
未来不是梦
7楼2012-04-27 16:21:21
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�?進興

新虫 (初入文坛)

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7?: Originally posted by ?????123 at 2012-04-27 16:21:21:
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annealing     60??
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8楼2012-04-27 16:53:16
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�?進興

新虫 (初入文坛)

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7?: Originally posted by ?????123 at 2012-04-27 16:21:21:
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               ????primer tccag tcgca tatga accat gtcat agagg gaacg ccaga
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denaturation 98??
annealing     60??
extension    68??
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9楼2012-04-27 16:53:37
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�?進興

新虫 (初入文坛)

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7?: Originally posted by ?????123 at 2012-04-27 16:21:21:
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10楼2012-04-27 16:54:02
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