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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 多重PCR与普通PCR反应的差别主要是什么
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随心凯

新虫 (初入文坛)

[求助] 多重PCR与普通PCR反应的差别主要是什么 已有2人参与

多重PCR与普通PCR反应的差别主要是什么？求详细解答。以及多重PCR一般用的酶有哪些？
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1楼 2015-01-04 13:43:58
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
随心凯: 金币+2 2015-01-07 16:08:39
多对引物同时扩增，其它没差别
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2楼2015-01-07 08:43:41
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随心凯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2015-01-07 08:43:41
多对引物同时扩增，其它没差别

谢谢！希望得到全面深入的解释。
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3楼2015-01-07 16:07:09
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★
随心凯: 金币+3, ★有帮助 2015-01-09 08:38:43
普通PCR就是一对引物(一对引物是两条单链核苷酸)，在PCR反应体系中，引物，模板，dNTP，酶，水就这几种主要的成分，进行普通PCR。
多重PCR就是不止一对引物，有两对引物以上的PCR才叫做多重PCR。为帮助你理解举个例子，在PCR时模板的长度是一定的，比如说模板是200bp的长度，在普通PCR时我们想要扩增的结果就是得到：这200bp模板扩增出来的双链，在经过25-30个循环之后，扩增出许多的200bp长度的模板链。但 如果现在我们要扩增1000bP的模板，如下序列举例
ATCGCTAAA  TTGGCTTT  CCGTTAC  AAAGTAA GTTATCC  GTAAGCTT
      1                 2              3            4            5             6
比如说以上序列（当然序列式我自己随机写的哈）在PCR时我们想要扩增1、3、5序列但是不想扩增2、4、6序列，这时候扩增1、3、5序列得设计三对引物才能扩增呢，这就叫做多重PCR（好理解不）所以说：需要两对以上引物的PCR才叫做多重PCR。
至于多重PCR用酶，那不要用普通的Taq酶，普通Taq酶特异性不好，易产生错配，尤其是多重PCR中极易产生错配，我扩增人类基因组6个区域的时候用的是热启动酶，能够精准扩增，效果很好。多重PCR酶还是选择热启动酶较好，普通Taq酶效果差，高保真酶又没必要使用，长片段酶也酶必要。
希望对你有所帮助哦，谢谢。如果您对酶还有什么问题，还可以咨询我哦。
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-01-08 10:24:27
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随心凯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-01-08 10:24:27
普通PCR就是一对引物(一对引物是两条单链核苷酸)，在PCR反应体系中，引物，模板，dNTP，酶，水就这几种主要的成分，进行普通PCR。
多重PCR就是不止一对引物，有两对引物以上的PCR才叫做多重PCR。为帮助你理解举个例 ...

我是做二代测序，多重PCR有上百对引物，最近一直查多重PCR的酶及其具体信息，你有什么推荐吗？
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5楼2015-01-09 08:42:17
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
引用回帖:
5楼: Originally posted by 随心凯 at 2015-01-09 08:42:17
我是做二代测序，多重PCR有上百对引物，最近一直查多重PCR的酶及其具体信息，你有什么推荐吗？...

上百对引物的，目前还没有做过~，我使用的是Relia热启动Taq酶，挑战过一百多对引物的实验，效果说的过去吧（毕竟实验的成功与否有各种因素有关 是吧）。
不过life公司的有一种酶效果还是可以的，但是就是贵啊。还有一点就是既然你用的是上百对的引物，模板链应该是很长的，可以试一下长片段扩增的酶（只是推荐 呵呵）但是长片段扩增的酶没有热启动 还是会有错配尤其对引物来说，引物自身会错配，所以还是选择热启动Taq酶较好。
希望对你有所帮助
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
6楼2015-01-09 09:50:27
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Somuch2learn

新虫 (初入文坛)
我也在做多重PCR，做了挺长时间了，也用过不少酶，推荐的是Biotium的Cheetah Taq 热启动酶，我做的是6重。而且我做多重定量PCR也是用这个酶配的反应液。
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7楼2016-01-29 17:18:02
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Somuch2learn

新虫 (初入文坛)
留下QQ吧，以后多多交流373397476 西北农林科技大
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8楼2016-01-29 17:19:55
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muchong5577

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Somuch2learn at 2016-01-29 17:19:55
留下QQ吧，以后多多交流373397476 西北农林科技大

做个标记，有时间再向你多多指教。
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9楼2016-03-11 17:18:10
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木虫爱学习

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-01-08 10:24:27
普通PCR就是一对引物(一对引物是两条单链核苷酸)，在PCR反应体系中，引物，模板，dNTP，酶，水就这几种主要的成分，进行普通PCR。
多重PCR就是不止一对引物，有两对引物以上的PCR才叫做多重PCR。为帮助你理解举个例 ...

请问下你们的退火延伸温度多少呀

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10楼2017-05-07 22:44:03
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