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1楼2015-04-14 21:04:07

shenma521

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建议重新合成引物再pcr方能解决你的问题，每次pcr要加上阳性和阴性对照！

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王叶kaoyan

2楼2015-04-14 21:40:16

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引用回帖:

2楼: Originally posted by shenma521 at 2015-04-14 21:40:16
建议重新合成引物再pcr方能解决你的问题，每次pcr要加上阳性和阴性对照！

为什么你觉得是引物的问题呢？还有我们做的时候一直是以marker做对照的，你说的阳性和阴性对照是什么意思？我是初学者，请教请教

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3楼2015-04-14 21:51:34

shenma521

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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-04-15 22:08:41

引用回帖:

3楼: Originally posted by 王叶kaoyan at 2015-04-14 21:51:34
为什么你觉得是引物的问题呢？还有我们做的时候一直是以marker做对照的，你说的阳性和阴性对照是什么意思？我是初学者，请教请教...

阳性对照指的是在pcr体系中肯定能p出条带，用来验证引物以及整个体系有无问题！
阴性对照一般是整个体系中不加模板，用水补齐，这样正常情况下是p不出条带的！
如果你有很大的把握认为引物没问题，我建议你用takara LA Taq酶进行pcr。
提高下你的退火温度，模板要加适量。

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4楼2015-04-14 23:13:25

shenma521

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引用回帖:

从你的电泳图上看，你配制的胶浓度小于等于1%,marker条带跑的也不好，电压大了不过还是你的胶没有煮完全溶解。

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5楼2015-04-14 23:18:41

王叶kaoyan

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4楼: Originally posted by shenma521 at 2015-04-14 23:13:25
阳性对照指的是在pcr体系中肯定能p出条带，用来验证引物以及整个体系有无问题！
阴性对照一般是整个体系中不加模板，用水补齐，这样正常情况下是p不出条带的！
如果你有很大的把握认为引物没问题，我建议你用tak ...

我们模板都是加1ul的

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6楼2015-04-15 09:33:22