应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助，110bp左右长的双链DNA用什么方法获得，序列中有重复。
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
61/1返回列表
查看: 1013  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sunday1234

新虫 (小有名气)

[交流] 求助，110bp左右长的双链DNA用什么方法获得，序列中有重复。 已有4人参与

想获得一段长110bp左右的双链DNA，序列为5‘-CTTTGGTCTCACCAAAACGTTAAATCCGAAACAGAGTCGTTTTAGAGCTATGCTGTTTTGAATGGTCCCAAAACTTAATCTTAGAACCTTCTGTGTTTTAGAGAGAGACCTTTC-3’，在公司里合成了该双链DNA，但由于连在载体上，需通过酶切回收得到，由于回收困难。所以想通过PCR扩增设计了引物正向：CTTTGGTCTCACCAAAAC反向：gaaaggtctctctctaaac，扩增后不加模板DNA，与加模板DNA都能扩出110bp左右的条带。想请教大家还有什么办法可以直接得到这个长110bp左右的双链DNA。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-03-03 16:48:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuderong

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
PCR扩不出来就把质粒转到细菌里然后提质粒做酶切吧。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
2楼2015-03-03 20:25:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一砖头飘死

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-03-07 23:04:51
首先跟你说下我自己做实验中遇到这样的问题的做法，有可能不完整，可以借鉴。

我的方法是这样的：
①首先设计一条完整的110bp的寡核苷酸单链，当做引物合成，这个可以让个引物合成公司完成,Primer1
②设计一段长约20bp的，和110bp寡核苷酸 3端完全互补的一段引物，Primer2
③加入Primer1 and Primer2 94度 5min ，冰上急冷（退火，让两条链结合上去）
③利用 Klenow Fragment DNA聚合酶，就有5到3端的聚合作用（补平粘性末端，形成完整的平末端）
④如果加入了酶切位点可以酶切后，用爱思进的PCR纯化试剂盒回收，记得加一个体积的异丙醇。

希望能帮到你………………
赞一下 回复此楼
3楼2015-03-04 08:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-03-07 23:05:13
巢式PCR，在质粒上先设计一段400BP的目片段，再用400P出110。
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2015-03-04 10:22:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunday1234

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 一砖头飘死 at 2015-03-04 08:55:43
首先跟你说下我自己做实验中遇到这样的问题的做法，有可能不完整，可以借鉴。

我的方法是这样的：
①首先设计一条完整的110bp的寡核苷酸单链，当做引物合成，这个可以让个引物合成公司完成,Primer1
②设计一段 ...

谢谢，这个办法挺好的，后期的实验中我们需要很多不同的110bp的序列每次都合成110bp的单链成本有点高，因为,不同的序列的不同之处在于整个序列有40bp碱基不同，需变更的地方用括号标注出。5‘-CTTTGGTCTCACCAAAAC（GTTAAATCCGAAACAGAGTC）GTTTTAGAGCTATGCTGTTTTGAATGGTCCCAAAAC（TTAATCTTAGAACCTTCTGT）GTTTTAGAGAGAGACCTTTC-3’，请问您有什么好的办法可以降低成本获得不同的110bp的片段吗
赞一下 回复此楼
5楼2015-03-19 14:47:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你用MN公司的凝胶回收试剂盒就一点都不困难了，何必PCR呢？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
6楼2015-03-19 17:28:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sunday1234 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 275求调剂 +10 jjjjjjjjjjl 2026-03-27 10/500 2026-03-27 23:47 by barnett0632
[考研] 315分求调剂 +6 26考研上岸版26 2026-03-26 6/300 2026-03-27 19:54 by WYUMater
[考研] 287求调剂 +10 land xuxu 2026-03-26 10/500 2026-03-27 15:33 by 帕尔马拉特
[考研] 一志愿太原理工安全工程300分，求调剂 +4 0857求调剂. 2026-03-24 4/200 2026-03-27 14:03 by 静静静静静静静�
[考研] 311求调剂 +7 lin0039 2026-03-26 7/350 2026-03-27 12:42 by 果果妈咪
[考研] 298调剂 +3 jiyingjie123 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:57 by wxiongid
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +10 材料学257求调剂 2026-03-23 11/550 2026-03-27 10:13 by YCIT- LHL
[考研] 336材料求调剂 +7 陈滢莹 2026-03-26 9/450 2026-03-27 00:20 by wxiongid
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 281求调剂 +3 亚克西good 2026-03-26 5/250 2026-03-26 19:48 by 不吃魚的貓
[考研] 279求调剂 +6 红衣隐官 2026-03-21 6/300 2026-03-26 18:32 by 不吃魚的貓
[考研] 281求调剂 +6 Koxui 2026-03-24 7/350 2026-03-26 15:37 by 无际的草原
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +10 纸鱼ly 2026-03-21 11/550 2026-03-24 17:22 by qingfeng258
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 300求调剂，材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭