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求助，110bp左右长的双链DNA用什么方法获得，序列中有重复。已有4人参与
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| 想获得一段长110bp左右的双链DNA，序列为5‘-CTTTGGTCTCACCAAAACGTTAAATCCGAAACAGAGTCGTTTTAGAGCTATGCTGTTTTGAATGGTCCCAAAACTTAATCTTAGAACCTTCTGTGTTTTAGAGAGAGACCTTTC-3’，在公司里合成了该双链DNA，但由于连在载体上，需通过酶切回收得到，由于回收困难。所以想通过PCR扩增设计了引物正向：CTTTGGTCTCACCAAAAC反向：gaaaggtctctctctaaac，扩增后不加模板DNA，与加模板DNA都能扩出110bp左右的条带。想请教大家还有什么办法可以直接得到这个长110bp左右的双链DNA。 |
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Neo2000
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6楼2015-03-19 17:28:12
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-03-07 23:04:51
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首先跟你说下我自己做实验中遇到这样的问题的做法，有可能不完整，可以借鉴。 我的方法是这样的： ①首先设计一条完整的110bp的寡核苷酸单链，当做引物合成，这个可以让个引物合成公司完成,Primer1 ②设计一段长约20bp的，和110bp寡核苷酸 3端完全互补的一段引物，Primer2 ③加入Primer1 and Primer2 94度 5min ，冰上急冷（退火，让两条链结合上去） ③利用 Klenow Fragment DNA聚合酶，就有5到3端的聚合作用（补平粘性末端，形成完整的平末端） ④如果加入了酶切位点可以酶切后，用爱思进的PCR纯化试剂盒回收，记得加一个体积的异丙醇。 希望能帮到你……………… |
3楼2015-03-04 08:55:43
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