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sunday1234

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[交流] 求助，110bp左右长的双链DNA用什么方法获得，序列中有重复。已有4人参与

想获得一段长110bp左右的双链DNA，序列为5‘-CTTTGGTCTCACCAAAACGTTAAATCCGAAACAGAGTCGTTTTAGAGCTATGCTGTTTTGAATGGTCCCAAAACTTAATCTTAGAACCTTCTGTGTTTTAGAGAGAGACCTTTC-3’，在公司里合成了该双链DNA，但由于连在载体上，需通过酶切回收得到，由于回收困难。所以想通过PCR扩增设计了引物正向：CTTTGGTCTCACCAAAAC反向：gaaaggtctctctctaaac，扩增后不加模板DNA，与加模板DNA都能扩出110bp左右的条带。想请教大家还有什么办法可以直接得到这个长110bp左右的双链DNA。

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1楼2015-03-03 16:48:11

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sunday1234

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引用回帖:

3楼: Originally posted by 一砖头飘死 at 2015-03-04 08:55:43
首先跟你说下我自己做实验中遇到这样的问题的做法，有可能不完整，可以借鉴。

我的方法是这样的：
①首先设计一条完整的110bp的寡核苷酸单链，当做引物合成，这个可以让个引物合成公司完成,Primer1
②设计一段 ...

谢谢，这个办法挺好的，后期的实验中我们需要很多不同的110bp的序列每次都合成110bp的单链成本有点高，因为,不同的序列的不同之处在于整个序列有40bp碱基不同，需变更的地方用括号标注出。5‘-CTTTGGTCTCACCAAAAC（GTTAAATCCGAAACAGAGTC）GTTTTAGAGCTATGCTGTTTTGAATGGTCCCAAAAC（TTAATCTTAGAACCTTCTGT）GTTTTAGAGAGAGACCTTTC-3’，请问您有什么好的办法可以降低成本获得不同的110bp的片段吗

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5楼2015-03-19 14:47:31

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