24小时热门版块排行榜    

查看: 3335  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

永恒_99

金虫 (正式写手)

[求助] 启动子与质粒正反向连接 已有5人参与

本人想将5个基因的启动子分别与特定的质粒正、反向连接,如何可以简便的操作。先合成带有已单酶切后序列的启动子片段,正反向连接质粒。如何实现保证正反向都能连接,而且怎么验证呢。
假如这种方法行不通,那么另一种基本的方法,就是设计带有双酶切位点的引物,PCR扩增片段,双酶切连接。反方向是交换上下游引物酶切位点。请问这么设想对吗。谢谢。本人初涉微生物领域。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永恒_99

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 王丹2013 at 2015-04-12 17:27:58
楼主的两种设想都可以实现,验证的话在质粒上另找一个酶切位点,对于第一种方法,用单酶切所用的酶和质粒上的这个酶切位点进行双酶切,根据切下来的产物大小来判断,前提是质粒序列已知;第二种方法验证方法类似,也 ...

好的,谢谢。
看到相关文献报道,pDN19lac这种穿梭质粒与启动子片段连接后,可否直接倒入目的菌株中,为什么要先导入大肠杆菌这一步呢。而且在这之前,为什么还要将启动子片段与另一种质粒连接,导入大肠杆菌中呢。望赐教。
6楼2015-04-12 21:13:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

biosci

捐助贵宾 (知名作家)


【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容

感谢参与,应助指数 +1
永恒_99: 金币+1, 有帮助 2015-04-12 14:51:11
无缝克隆试剂,一步搞定,妥妥的

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-04-12 08:33:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

东走西步

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
永恒_99: 金币+1, 有帮助 2015-04-12 14:51:22
可以尝试融合PCR的方法,应该比酶切酶连快一点。具体方法参照张一恒的simple cloning
3楼2015-04-12 11:00:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永恒_99

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 东走西步 at 2015-04-12 11:00:08
可以尝试融合PCR的方法,应该比酶切酶连快一点。具体方法参照张一恒的simple cloning

你好,非常感谢,从哪里能下载到张一恒的simple cloning,谢谢。
4楼2015-04-12 14:49:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 7/350 2026-09-01 15:18 by myrtle
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +4 瞬息宇宙 2026-08-31 4/200 2026-09-01 14:58 by jiaoxg
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 8/400 2026-09-01 12:58 by ssyjh
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 15/750 2026-09-01 12:23 by icm639
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
请填处理意见