| 查看: 2150 | 回复: 3 | ||
[求助]
BamH 1 和Pst 1 酶切后，用什么酶补齐5‘和3’ 末端 已有1人参与
|
| 如题，我有一个DNA片段，是用BamH 1 和Pst 1 酶切的，这样就产生了5‘和3’粘性末端。接下来我想用这两个酶酶切后的产物与T载体连接，这样就需要把酶切后的粘性末端补齐了。但是我不知道该用什么酶来补齐3‘和5’末端。希望大家能帮帮我。 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有123人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 易错PCR酶切与连接
已经有23人回复
- pet28a 空质粒双酶切图像问题
已经有15人回复
- 质粒测序后blast结果分析（菜鸟求助）
已经有15人回复
- pet32a做载体，结果这一块做了三个月了还没连接成功
已经有30人回复
- 重组质粒构建 连接转化效率低 求帮助啊
已经有19人回复
- 双酶切后，质粒条带弥散
已经有13人回复
- PET28a重组质粒酶切后有三条？
已经有10人回复
- EcoR1酶切体系
已经有11人回复
- 用Nde1和Pst1双酶切，构载体总是不成功
已经有4人回复
- 关于双酶切和通用buffer的问题
已经有4人回复
- 双酶切问题，跪求指导啊
已经有5人回复
- PBI121载体酶切后回收
已经有28人回复
- 关于双酶切作用时间
已经有10人回复
- SaII和BamHI双酶切切不开
已经有18人回复
- Not I/BamH I双酶切体系缓冲液的选择问题
已经有13人回复
- pet28a双酶切出现这种情况
已经有10人回复
- PCR产物双酶切遇到问题，求救！！！
已经有7人回复
- 重组质粒单双酶切结果一样，奇怪了的……
已经有15人回复
- 请问Not I的酶切效率怎样，过夜酶切都没切开！！
已经有17人回复
- 神奇的质粒提取，花儿一样神奇的单酶切跑胶！
已经有34人回复
- 提取的质粒跑出四条或者五条带，但酶切后只有一条带，是不是我的质粒污染了
已经有18人回复
- 求真菌表达载体pBARGPE1的酶切方法！！！
已经有11人回复
- 【求助/交流】BamHI酶切
已经有27人回复
- 【求助/交流】急！！！！酶切位点切不开
已经有8人回复
- 【求助/交流】大家有没有用过Xba 1 和 BamH 1我怎么切不开啊~~急~
已经有21人回复
我欲乘风归去
木虫 (正式写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 3280.1
- 散金: 1055
- 红花: 26
- 帖子: 841
- 在线: 878.8小时
- 虫号: 3340869
- 注册: 2014-07-27
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
2楼2015-04-03 16:23:32
【答案】应助回帖
|
用T4 DNA polymerase，既可以补平5‘粘性末端，又可以切去3’粘性末端。 我一般用都是Fermentas的T4 DNA polymerase，货号EP0061。 1.Prepare the following reaction mixture: 5X reaction buffer 4 μL Linear DNA or PCR product 1 μg dNTP Mix, 2 mM each (#R0241) 1 μL (0.1 mM final concentration) T4 DNA Polymerase 0.2 μL (1 U) Water, nuclease-free (#R0581) to 20 μL 2.Mix thoroughly, spin briefly and incubate at 11°C for 20 min or at room temperature for 5 min. 3.Stop the reaction by heating at 75°C for 10 min. |
3楼2015-04-07 09:07:37
4楼2018-04-04 12:24:17
