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BamH 1 和Pst 1 酶切后，用什么酶补齐5‘和3’ 末端 已有1人参与
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| 如题，我有一个DNA片段，是用BamH 1 和Pst 1 酶切的，这样就产生了5‘和3’粘性末端。接下来我想用这两个酶酶切后的产物与T载体连接，这样就需要把酶切后的粘性末端补齐了。但是我不知道该用什么酶来补齐3‘和5’末端。希望大家能帮帮我。 |
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我欲乘风归去
木虫 (正式写手)
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- 注册: 2014-07-27
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
2楼2015-04-03 16:23:32
【答案】应助回帖
|
用T4 DNA polymerase，既可以补平5‘粘性末端，又可以切去3’粘性末端。 我一般用都是Fermentas的T4 DNA polymerase，货号EP0061。 1.Prepare the following reaction mixture: 5X reaction buffer 4 μL Linear DNA or PCR product 1 μg dNTP Mix, 2 mM each (#R0241) 1 μL (0.1 mM final concentration) T4 DNA Polymerase 0.2 μL (1 U) Water, nuclease-free (#R0581) to 20 μL 2.Mix thoroughly, spin briefly and incubate at 11°C for 20 min or at room temperature for 5 min. 3.Stop the reaction by heating at 75°C for 10 min. |
3楼2015-04-07 09:07:37
4楼2018-04-04 12:24:17