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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 测序结果不对
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fangwenyuan

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序结果不对 已有2人参与

急急急，求助，我做了PCR然后连接到T载体，菌落PCR验证是有的，但是测序结果都不对，完全不匹配，我做PCR延生的温度是68度是不是有影响。
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1楼 2015-04-02 21:01:19
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以重新挑个菌去测下。
另外，连接T载体后测序可能结果是反向互补的，你把测序结果反向互补下看看。
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2楼2015-04-03 11:20:56
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hailunl

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、测序结果比对时候，选用反向互补；如果依旧不对，2、可能是没连上去，因为PCR能扩出条带，不一定就是你目标条带，PCR不严格，不能完全说明问题。此种情况，建议，挑选多个单克隆，进行PCR，挑选最亮的且条带大小一致的送去测序。
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3楼2015-04-03 13:53:45
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xrl123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hailunl at 2015-04-03 13:53:45
1、测序结果比对时候，选用反向互补；如果依旧不对，2、可能是没连上去，因为PCR能扩出条带，不一定就是你目标条带，PCR不严格，不能完全说明问题。此种情况，建议，挑选多个单克隆，进行PCR，挑选最亮的且条带大小 ...

我也是这个问题啊  ，  PCR都是有条带的，而且大小和我目的片段差不多，  但用通用引物测序，结果比对相似度40%，只有两端序列几十bp相同，包含了我加上去的酶切位点，但是中间序列都不同。有没有人知道为什么啊
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4楼2017-04-14 15:43:27
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露娜823

新虫 (初入文坛)
有可pcr出来错误，也有可能你的菌株突变了

发自小木虫IOS客户端
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5楼2017-04-16 14:11:35
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