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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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fangwenyuan

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序结果不对 已有2人参与

急急急,求助,我做了PCR然后连接到T载体,菌落PCR验证是有的,但是测序结果都不对,完全不匹配,我做PCR延生的温度是68度是不是有影响。
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xrl123

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hailunl at 2015-04-03 13:53:45
1、测序结果比对时候,选用反向互补;如果依旧不对,2、可能是没连上去,因为PCR能扩出条带,不一定就是你目标条带,PCR不严格,不能完全说明问题。此种情况,建议,挑选多个单克隆,进行PCR,挑选最亮的且条带大小 ...

我也是这个问题啊  ,  PCR都是有条带的,而且大小和我目的片段差不多,  但用通用引物测序,结果比对相似度40%,只有两端序列几十bp相同,包含了我加上去的酶切位点,但是中间序列都不同。有没有人知道为什么啊
4楼2017-04-14 15:43:27
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以重新挑个菌去测下。
另外,连接T载体后测序可能结果是反向互补的,你把测序结果反向互补下看看。
2楼2015-04-03 11:20:56
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hailunl

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1、测序结果比对时候,选用反向互补;如果依旧不对,2、可能是没连上去,因为PCR能扩出条带,不一定就是你目标条带,PCR不严格,不能完全说明问题。此种情况,建议,挑选多个单克隆,进行PCR,挑选最亮的且条带大小一致的送去测序。
3楼2015-04-03 13:53:45
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露娜823

新虫 (初入文坛)

有可pcr出来错误,也有可能你的菌株突变了

发自小木虫IOS客户端
5楼2017-04-16 14:11:35
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