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刺角魔蜥

银虫 (初入文坛)

[求助] 条件、引物不变的情况下琼脂糖凝胶电泳条带弱; PCR产物测序双峰 已有1人参与

一切条件都没变,原来是要么没条带,要么就比较清晰,最近pcr产物电泳条带变弱。    而且PCR产物 测序,总是出现双峰,模板为节肢动物的线粒体DNA,约800bp,可能是那些方面的原因;  引物会不会导致这些现象,引物为通用引物,是不是引物不纯会造成这些原因?
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刺角魔蜥

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yangyang1991 at 2015-04-02 21:46:59
用的水是不是污染了?引物之前也用了,那应该没问题。用的试剂都换换,排除污染。。。

这个是无脊椎动物COI基因的特异性引物,对灭菌什么的不很严格,一直暴露在空气中操作,污染的可能性不大, 裂解液什么的都换过了,感觉这批引物不是太好。顺便问一下双峰对测序结果有什么影响,结果还可信吗?blast了一下测序结果,物种的大类是对的。
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3楼2015-04-02 22:00:48
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yangyang1991

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
刺角魔蜥: 金币+4, 有帮助 2015-04-03 13:16:06
用的水是不是污染了?引物之前也用了,那应该没问题。用的试剂都换换,排除污染。。。
2楼2015-04-02 21:46:59
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