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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 条件、引物不变的情况下琼脂糖凝胶电泳条带弱； PCR产物测序双峰
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刺角魔蜥

银虫 (初入文坛)

[求助] 条件、引物不变的情况下琼脂糖凝胶电泳条带弱； PCR产物测序双峰已有1人参与

一切条件都没变，原来是要么没条带，要么就比较清晰，最近pcr产物电泳条带变弱。    而且PCR产物 测序，总是出现双峰，模板为节肢动物的线粒体DNA，约800bp，可能是那些方面的原因；  引物会不会导致这些现象，引物为通用引物，是不是引物不纯会造成这些原因？
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Evertried.Everfailed.Nomatter.Tryagain.Failagain.Failbetter
1楼2015-04-02 13:21:34
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yangyang1991

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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刺角魔蜥: 金币+4, ★有帮助 2015-04-03 13:16:06
用的水是不是污染了？引物之前也用了，那应该没问题。用的试剂都换换，排除污染。。。
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2楼2015-04-02 21:46:59
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刺角魔蜥

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yangyang1991 at 2015-04-02 21:46:59
用的水是不是污染了？引物之前也用了，那应该没问题。用的试剂都换换，排除污染。。。

这个是无脊椎动物COI基因的特异性引物，对灭菌什么的不很严格，一直暴露在空气中操作，污染的可能性不大， 裂解液什么的都换过了，感觉这批引物不是太好。顺便问一下双峰对测序结果有什么影响，结果还可信吗？blast了一下测序结果，物种的大类是对的。
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Evertried.Everfailed.Nomatter.Tryagain.Failagain.Failbetter
3楼2015-04-02 22:00:48
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