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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 引物条件摸索时扩增条带很亮，具体扩条带会出现拖带现象。大神帮忙解答。
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新虫 (小有名气)

[求助] 引物条件摸索时扩增条带很亮，具体扩条带会出现拖带现象。大神帮忙解答。 已有2人参与

实验已经反反复复很多次，结果竟然惊人的一致：引物条件摸索时候，发现条带很亮（10ul体系摸索）。但是具体扩增条带时（体系是50ul）会出现拖带现象。扩增酶是pfu。
   查找原因的时候，引物重新合成，质粒重新提取，结果如图。思索之后，引物后又添加10碱基，增强特异性，但是结果如初。
求大神解答。呜呜。。。。。

引物条件摸索时扩增条带很亮，具体扩条带会出现拖带现象。大神帮忙解答。
胶回收.jpg


引物条件摸索时扩增条带很亮，具体扩条带会出现拖带现象。大神帮忙解答。-1
退火温度条件摸索.jpg
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1楼 2015-03-31 09:38:01
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xuejia174

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
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2楼2015-03-31 10:15:46
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换个酶吧，建议使用热启动聚合酶，扩增还是很有保证的，一般的实验没有针对到一个碱基的不建议使用高保真酶
可以看看选择吧http://www.detaibio.com/dna-taq-polymerase.html 呵呵
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-03-31 10:19:34
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新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xuejia174 at 2015-03-31 10:15:46
加大模板量，把酶换一下

加大模版量后会产生拖带现象

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-11-03 14:03:54
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新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-03-31 10:19:34
换个酶吧，建议使用热启动聚合酶，扩增还是很有保证的，一般的实验没有针对到一个碱基的不建议使用高保真酶
可以看看选择吧http://www.detaibio.com/dna-taq-polymerase.html 呵呵

什么是没有针对到一个碱基

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2015-11-03 14:06:55
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