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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于PCR的问题。
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洛可可薇薇

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于PCR的问题。 已有5人参与

各位大神，这是我看文献上的PCR反应程序：95℃预变性15min；共35个循环,94℃变性1min， 55℃退火1min，72℃1min和30s,72℃延伸10min。我想请教下，72℃1min和30s是代表什么意思呢？如果是退火，为什么要强调出来？
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1楼 2015-03-29 12:00:02
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xydjlove

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
6楼: Originally posted by 洛可可薇薇 at 2015-03-30 08:33:15
那再请问下，为啥作者要单独提出来这个1分30秒呢？为啥不说延伸时间是11分30秒......

后面的十分钟是总延伸，是所有循环跑完之后，将未延伸完全的链延伸完全，形成完整的双链。

[ 发自小木虫客户端 ]
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活在当下
8楼2015-03-30 10:14:19
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babybluecj

新虫 (初入文坛)
★
洛可可薇薇(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-03-30 20:49:55
引用回帖:
6楼: Originally posted by 洛可可薇薇 at 2015-03-30 08:33:15
那再请问下，为啥作者要单独提出来这个1分30秒呢？为啥不说延伸时间是11分30秒......

因为那个1分30秒是循环中的延伸。这个第二步到第四步是要重复35次的。
35次循环之后，还要再进行一次10分钟的延伸。
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14楼2015-03-30 20:08:03
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普通回帖

胡程

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你说的是1分钟30秒吧
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做最好的自己
2楼2015-03-29 12:41:41
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洛可可薇薇

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 胡程 at 2015-03-29 12:41:41
你说的是1分钟30秒吧

噢，对，应该是，那请问这是属于退火的步骤吗？
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3楼2015-03-29 13:45:59
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xydjlove

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 洛可可薇薇 at 2015-03-29 13:45:59
噢，对，应该是，那请问这是属于退火的步骤吗？...

退火步骤是55℃，后面的1分三十秒是延伸时间，是引物结合到模板后，新链合成的时间。
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活在当下
4楼2015-03-29 21:59:16
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胡程

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 洛可可薇薇 at 2015-03-29 13:45:59
噢，对，应该是，那请问这是属于退火的步骤吗？...

楼下说得对，55退火，72延伸，退火温度一般在50-60度左右，我做的克隆，基因在53℃，祝你成功喽
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做最好的自己
5楼2015-03-30 08:22:25
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洛可可薇薇

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xydjlove at 2015-03-29 21:59:16
退火步骤是55℃，后面的1分三十秒是延伸时间，是引物结合到模板后，新链合成的时间。...

那再请问下，为啥作者要单独提出来这个1分30秒呢？为啥不说延伸时间是11分30秒...
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6楼2015-03-30 08:33:15
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
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洛可可薇薇(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-03-30 20:48:44
你看的这啥文献啊？预变性15min？没有这么长时间，最多3min不得了啦，不要用15min
延伸分为两步 延伸和终延伸。延伸，是以你加入的primer为引物从5‘--->3'合成DNA的互补链, 在循环结束后一般要终止延伸8-10min,这样可以补齐所有DNA链,有些链可能在循环过程中只合成了一半,终止延伸呢,就是提高完整双链DNA的比率
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-03-30 08:57:51
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-03-30 08:57:51
你看的这啥文献啊？预变性15min？没有这么长时间，最多3min不得了啦，不要用15min
延伸分为两步 延伸和终延伸。延伸，是以你加入的primer为引物从5‘--->3'合成DNA的互补链, 在循环结束后一般要终止延伸8-10min ...

热启动酶就这样，没错的
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9楼2015-03-30 11:27:42
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by bbqlhb at 2015-03-30 11:27:42
热启动酶就这样，没错的...

恩恩，那就差不多了，普通的Taq DNA聚合酶不会有15min的，但是我们一般使用的热启动聚合酶预变性10min就能激活酶的活性了，15min时间还挺长的，你用的是热启动酶名字是啥？
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
10楼2015-03-30 13:46:35
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