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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于PCR的问题。
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洛可可薇薇

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于PCR的问题。 已有5人参与

各位大神，这是我看文献上的PCR反应程序：95℃预变性15min；共35个循环,94℃变性1min， 55℃退火1min，72℃1min和30s,72℃延伸10min。我想请教下，72℃1min和30s是代表什么意思呢？如果是退火，为什么要强调出来？
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1楼 2015-03-29 12:00:02
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-03-30 08:57:51
你看的这啥文献啊？预变性15min？没有这么长时间，最多3min不得了啦，不要用15min
延伸分为两步 延伸和终延伸。延伸，是以你加入的primer为引物从5‘--->3'合成DNA的互补链, 在循环结束后一般要终止延伸8-10min ...

热启动酶就这样，没错的
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9楼2015-03-30 11:27:42
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胡程

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你说的是1分钟30秒吧
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做最好的自己
2楼2015-03-29 12:41:41
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洛可可薇薇

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 胡程 at 2015-03-29 12:41:41
你说的是1分钟30秒吧

噢，对，应该是，那请问这是属于退火的步骤吗？
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3楼2015-03-29 13:45:59
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xydjlove

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 洛可可薇薇 at 2015-03-29 13:45:59
噢，对，应该是，那请问这是属于退火的步骤吗？...

退火步骤是55℃，后面的1分三十秒是延伸时间，是引物结合到模板后，新链合成的时间。
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活在当下
4楼2015-03-29 21:59:16
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